[发明专利]一种氯氮平有关物质的超高效液相色谱分析方法

说明书

本发明公开了一种氯氮平的超高效液相色谱分析方法，使用Waters UPLC AcQuity H‑Class，采用Agilent Rapid Resolution HD柱，以甲醇‑磷酸二氢钾‑水为流动相进行梯度洗脱。本方法可同时分析氯氮平原料及其制剂中的所有已知杂质，并且可通过加校正因子的主成分自身对照法有效控制已知杂质含量，主峰与相邻杂质峰及各杂质峰之间的分离度均大于1.5。此方法简洁时间短，杂质分析准确，为氯氮平提供可靠的分析方法。

技术领域

本发明涉及一种化学药物纯度的分析方法，具体地说是一种氯氮平有关物质的超高效液相色谱分析方法。

背景技术

氯氮平(Clozapine)，化学名为8-氯-11-(4-甲基-1-哌嗪基)-5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂，其结构式如下所示：

氯氮平为首个非典型精神病治疗药物，于1989、1990年先后在瑞典和美国上市，锥体外系不良反应小，对难治性精神分裂症和精神分裂症患者暴力行为有效，能降低患者住院率，减少治疗费用。

目前，合成氯氮平的方法(中国医药工业杂志，2013，44(10))是以2,5-二氯硝基苯与邻氨基苯甲酸进行乌尔曼缩合反应得2-(4-氯-2-硝基苯胺基)苯甲酸，然后硝基还原生成2-(2-氨基-4-氯苯胺基)苯甲酸，再脱水环合、N-甲基哌嗪缩合得到氯氮平。

根据合成工艺分析，其杂质主要来源于引入的反应原料(杂质A和F)，反应工艺杂质(杂质B和C)，降解杂质(杂质D和E)。

EP药典9.0和USP药典40仅研究了杂质A、B、C、D，CP药典2015版仅对未知杂质作限定。

滕南雁等在(HPLC法测定氯氮平原料中有关物质的含量)中也仅对A、B、C进行了分析检测。并且已有的药典文献均为普通液相方法，检测时间较长。

建立在全面杂质谱分析基础上的氯氮平原料及其制剂有关物质分析方法目前还没有相关的文献报道。

发明内容

本发明针对现有药典及文献报道，基于全面的杂质谱分析基础上建立一种新的超高效液相色谱分析方法。发明人通过工艺开发、强制降解试验对氯氮平杂质进行富集、分离提纯，鉴定了6个主要已知杂质，并且对杂质进行了溯源归属，包括(杂质A、杂质F)、反应副产物(杂质B、杂质C)及降解杂质(杂质D、杂质E)。

发明人应用C18柱，直接应用超高效液相色谱方法，经对流动相组成及比例的优化筛选，确定本发明的分析方法。同时按中国药典2015年版四部通则0512(高效液相色谱法)及通则9101(药品质量标准分析方法验证指导原则)的定义和验证方法，进行专属性验证，结果表明该方法可同时分析氯氮平原料及其制剂中的所有已知杂质，并且可通过加校正因子的主成份自身对照法有效控制各已知杂质含量，各杂质峰与主峰之间的分离度大于1.5。

本发明氯氮平有关物质的超高效液相色谱分析方法，采用反相色谱柱及紫外检测器，是以甲醇-水-磷酸盐缓冲液的混合溶液为流动相，进行梯度洗脱，包括如下步骤：

(1)样品配制：取氯氮平原料或片剂，用体积比为80:20的甲醇-水溶液超声溶解，过滤或者离心，配制成浓度为0.075mg/ml的氯氮平溶液；

(2)色谱条件设置：采用反相C18柱，柱温设置在35℃；以体积比为25：75的甲醇-缓冲盐为流动相A，以体积比为90：10的甲醇-缓冲盐为流动相B，进行梯度洗脱；流速为0.35ml/min；检测波长为257nm；洗脱液由流动相A和流动相B构成；

(3)检测：取步骤(1)配制的氯氮平溶液，进样2μl，记录色谱图。

步骤(2)中反相C18柱选自Agilent C18 Rapid Resolution HD(150×2.1mm，1.8μm)。