[发明专利]一种利用无机杂化纳米花酶快速检测二胺类生物胺的方法

说明书

本发明涉及一种利用无机杂化纳米花酶快速检测二胺类生物胺的方法，包括以下步骤：1)将金属离子加入至二胺氧化酶溶液中，配制无机杂化纳米花酶分散液；2)将二胺类生物胺溶液与无机杂化纳米花酶分散液混合后，在45‑55℃下反应10‑30min，得到反应液；3)加入辣根过氧化物酶溶液及TMB显色溶液，显色后加入稀盐酸终止反应，得到样品；4)将样品置于分光光度计中检测吸光度值，得到二胺类生物胺的浓度。与现有技术相比，本发明有以下优点：1)操作过程简单，专业要求不高；2)实验结果可直接用肉眼判断，简单明了；3)得到结果快速，整个过程在25min左右可以得到结果，适合现场检测；4)无机杂化纳米花酶的酶活比普通液酶提高了85.27％。

技术领域

本发明属于生物胺检测技术领域，涉及一种利用无机杂化纳米花酶快速检测二胺类生物胺的方法。

背景技术

生物胺是一类非挥发性具有生物活性的低分子含氮有机碱，根据氨基数目可分为单胺和二胺，其中二胺类生物胺主要包括组胺、腐胺等。生物胺主要是通过游离的氨基酸在细菌中脱羧酶的催化作用下形成，因此富含氨基酸的食品中往往存在一定量的生物胺，如乳制品、发酵酒类、腌制水产品和肉制品等。

低浓度的生物胺是生物体内的正常活性成分，在生物细胞中具有重要的生理功能，但是摄入高浓度的生物胺，对人体具有毒性作用。其中，组胺对人类健康的影响最大。食用高浓度的组胺会导致各种症状，包括恶心、呕吐、腹泻、红疹、口腔灼热感和皮肤瘙痒等。美国FDA通过对爆发组胺中毒的大量数据的研究确定组胺的危害作用水平为500mg/kg(食品)，要求进口水产品组胺不得超过50mg/kg；欧盟规定鲭科鱼类中组胺含量不得超过100mg/kg；其它食品中组胺不得超过1000mg/kg。腐胺多存在于腐败的食品中，腐胺的增加不仅会对风味产生负面影响，还会对食品安全和人体健康造成潜在威胁。食用含有大量腐胺的食物会导致严重的毒理学后果。

近年来，许多分析方法被开发用于检测此类生物胺，应用最为广泛的为高效液相色谱法、毛细管气相色谱法、毛细管区带电泳法、离子交换色谱法等，这些分析方法的优点是分离效果好、检出限低，但缺点也同样明显，例如仪器昂贵、操作的专业性强、步骤复杂、需要大量的有机溶剂等。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种利用无机杂化纳米花酶快速检测组胺、腐胺等二胺类生物胺的方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种利用无机杂化纳米花酶快速检测二胺类生物胺的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)将金属离子加入至二胺氧化酶溶液中，配制无机杂化纳米花酶分散液；

2)将二胺类生物胺溶液与无机杂化纳米花酶分散液混合后，在45-55℃下反应10-30min，得到反应液；

3)将辣根过氧化物酶溶液及TMB显色溶液加入至反应液中，显色后加入稀盐酸终止反应，得到样品；

4)将样品置于分光光度计中检测吸光度值，进而得到二胺类生物胺溶液中二胺类生物胺的浓度。

进一步地，步骤1)中，所述的金属离子包括Co²⁺或Ca²⁺中的一种或两种。

进一步地，步骤1)中，所述的二胺氧化酶溶液的制备过程为：将二胺氧化酶加入至浓度为0.05-1mol/L、pH为7-7.5的PBS缓冲液中，配制成浓度为0.1-10mg/mL的溶液。

进一步地，步骤1)中，所述的无机杂化纳米花酶分散液的制备过程具体为：将金属离子加入至二胺氧化酶溶液中，在室温下放置2-4天，之后离心、水洗，得到沉淀物(无机杂化纳米花酶)，将沉淀物分散于水中，得到无机杂化纳米花酶分散液。