[发明专利]一种人胎盘提取物上清液制备方法

说明书

本发明提供了一种人胎盘提取物上清液制备方法；包括：将足月正常分娩胎盘,去除多余血管、组织成分，用机械法，制得胎盘组织匀浆；清洗胎盘组织匀浆，并进行深低温反复冻融；将反复冻融后的胎盘组织匀浆进行离心、过滤，提取上清液；将上清液送检，检测生长因子的含量，同时检测细菌、真菌、病毒、支原体、内毒素，得到上清液终产品。本发明方法提取制备的胎盘组织上清液中，四种生长因子均得到释放并高表达，通过上清液终产品的体积调整，可获取高生长因子含量的上清液产品，且该上清液制备过程无病原微生物、细菌、真菌、支原体、内毒素污染风险，安全性、有效性得到了保障和提升。

技术领域

本发明属于胎盘的提取制备和应用领域；尤其涉及一种人胎盘提取物上清液制备方法。

背景技术

胎盘是哺乳类胎生动物在怀胎时为胎儿提供养分，让胚胎生长的特殊组织，它在分娩时排出体外，因其特殊的屏障功能和内分泌功能，自古以来就为人们所重视。现代生物学和医学研究证明，胎盘中含有可增强机体免疫力，抑制病毒侵害细胞的免疫球蛋白；含有17种氨基酸，其中包括7种必须氨基酸，且提取液的氨基酸多以多肽的形式存在，易于被机体吸收利用；含有多种激素包括人绒毛膜促性腺激素、催乳素、人绒毛促甲状腺激素、促肾上腺皮质激素释放激素、雌二酮、雌酮、孕酮及雄激素等。除此之外还含有矿物质，细胞因子和生长因子及多种酶。

目前，在胎盘提取物的研究当中，大多数胎盘提取物的研究多以胎盘中的酶、多肽、氨基酸、胶原蛋白为主，并加入各种化学添加试剂，以达到应用的效果，但由于其提取方式复杂，提取制备时所用化学、生物试剂较多，导致其中有效成分发生大量改变，而且提取物所含杂质较多，成分复杂，故并不适合应用于护肤品领域。

发明内容

本发明提供了一种人胎盘提取物上清液制备方法。本发明从生长因子出发，在不添加任何生物化学试剂的情况下，检测四种常见生长因子含量，揭示胎盘提取物上清液中内含的生长因子在美容抗衰领域的应用前景。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明涉及一种人胎盘提取物上清液制备方法，所述方法包括如下步骤：

步骤1，将足月正常分娩胎盘,剥离出胎盘组织，剪碎后再采用机械匀浆法，制得胎盘组织匀浆；

步骤2，清洗胎盘组织匀浆，并进行深低温反复冻融；

步骤3，将反复冻融后的胎盘组织匀浆进行离心、过滤，提取上清液；

步骤4，将上清液送检，检测生长因子的含量，同时检测细菌、真菌、病毒、支原体、内毒素，得到上清液终产品。

优选地，步骤1中，所述胎盘为捐献所得。

优选的，步骤1中，剥离出的胎盘组织主要为去除胎盘羊膜、绒毛膜、底蜕膜及其附带的血管、筋膜后所得的胎盘组织。

优选地，步骤1中，所述机械法具体为采用手持匀浆仪搅拌完成，所述手持匀浆仪为1-250ml规格转头。

优选地，步骤2中，所述深低温反复冻融具体步骤为：将组织匀浆样本封口膜封口后，放入-80℃冰箱冷冻12h以上，取出样本，放入37.5℃水浴锅5min内解冻融化，再次重复此步骤。

优选地，所述深低温反复冻融的次数为2次。

优选地，步骤3中，所述离心具体为：取经过剪碎清洗后的胎盘组织10ml于50ml离心管中，用手持匀浆仪，以12000rpm转速对组织进行匀浆处理。

优选地，步骤3中，所述过滤具体为：经100目筛网过滤，再经过0.22um滤器过滤。

优选地，步骤3中，所述生长因子为FGF、VEGF、PDGF-AB、IGF-1四种。

步骤3中，所述检测具体步骤：用ELISA生长因子检测试剂盒对因子含量进行检测。