[发明专利]一种新型冠状病毒RNA核酸检测质控品及其制备方法

说明书

本发明提供一种新型冠状病毒RNA核酸检测质控品，用于全方位监测COVID‑19核酸检测过程。新型冠状病毒RNA核酸检测质控品的大致制备流程包括：1)COVID‑19 ORF1ab及N基因的片段整合与质粒扩增；2)改装噬菌体的表达体系的扩增；3)伪病毒颗粒的表达与纯化鉴定；4)定量检测并分装。本发明提供的新型冠状病毒RNA核酸检测质控品与实际COVID‑19病毒颗粒具有结构一致性，可真实地模拟COVID‑19病毒颗粒在体外核酸检测过程，从而实现对COVID‑19核酸检测的全方位监控；产品具有成本低廉、稳定性高、便于储存与转运等优势，便于工业级别的大规模生产。综上，本发明具有重要的价值与应用前景。

技术领域

本发明属于新型冠状病毒核酸检测领域，尤其涉及一种基于流感病毒载体的新型冠状病毒RNA核酸检测质控品及其制备方法。

背景技术

新型冠状病毒感染的肺炎是一种急性感染性肺炎，被感染肺炎后，起初出现发热、乏力、干咳，逐渐出现呼吸困难等；具备人传染人的能力，需正确佩戴口罩加强防护；如早期诊断并接受治疗，多数患者预后良好；部分严重病例可出现急性呼吸窘迫综合征或脓毒症休克，甚至死亡。目前，缺乏针对病原体的有效抗病毒药物，以隔离治疗、对症支持治疗为主，故目前临床治疗 COVID-19的关键先决条件在于早期诊断。

COVID-19是一种单链RNA病毒。尽管目前已有多种方法用于COVID-19 的分子诊断，但是综合灵敏度、特异性、以及成本等多方面考量，实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法被认为是目前一线诊断COVID-19的最佳方法。依据国家卫生健康委员会发布的新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南，在实验室要确认一个病例为阳性，需满足同一份标本中新冠病毒的ORF1ab及N 基因2个靶标特异性RT-PCR检测结果均为阳性，或单靶标阳性患者重新采样 /另一类型样本检测仍为单靶标阳性。目前，在大规模开展RT-PCR检测后， COVID-19的平均诊断时间已大大缩短，仅为4.95天。这一即时诊断策略对于尽早实施治疗，提高患者康复率具有重要贡献，是防控COVID-19过程中的里程碑事件。但是，在此过程中仍存在不足：不同厂家研发试剂盒的检出率存在较大差异，检测结果出现不符合时难以评估孰优孰劣；不同批次PCR试剂盒的检测能力是否一致仍无法考量；上述不足究其原因是目前仍缺乏用于特定的、符合条件的阳性质控品对整体检测流程进行评估，无法对整体检测流程进行准确评估。

到目前为止，RNA核酸检测质控品主要分为两类：裸露RNA质控品和病毒样颗粒质控品。裸露RNA质控品由于其低成本、制备均一性好、易大批量生产等特点，成为目前最为流行的RNA病毒检测质控物质，可以作为内部标准品监测逆转录和扩增等过程，使得对病毒RNA负荷定量成为可能。但是，裸露RNA有其固有缺陷：极易被环境内广泛存在的RNase降解，这就给其制备、运输、贮存、应用等过程提出难于解决的技术性问题。虽然世界卫生组织(WHO)能够提供针对某些RNA病毒的质控品，可是其价格昂贵、供应量有限，并且是裸露RNA，很难满足实际工作的需要。另一方面，病毒样颗粒质控品是一个近年来刚刚兴起的新型产品，通过将外源基因序列克隆到含有病毒基因的质粒上，经诱导表达，包膜蛋白组装制备形成病毒样颗粒，从而达到将外源基因转录产物(RNA标准品序列)包装到病毒样颗粒内部的目的。此类质控品具有RNase抗性，可有效耐受RNase的降解，因此可以作为室内质控品或试剂盒标准品用于病毒RNA检测全过程的监测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种新型冠状病毒RNA核酸检测质控品及其制备方法，质控品与实际COVID-19病毒颗粒具有结构一致性，可真实地模拟COVID-19病毒颗粒在体外核酸检测过程，从而实现对COVID-19核酸检测的全方位监控；质控品具有成本低廉、稳定性高、便于储存与转运等优势，便于工业级别的大规模生产。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种新型冠状病毒RNA核酸检测质控品，用于全方位监测COVID-19核酸检测过程。

本发明还提供一种新型冠状病毒RNA核酸检测质控品的制备方法，包括如下步骤：