[发明专利]海洋水体中生物蝶呤的检测方法

说明书

本发明提供一种海洋水体中生物蝶呤的检测方法，包括以下步骤：前处理：水样过滤后弃滤液，取颗粒物并加入细胞裂解液破碎，得到溶出液；调节所述溶出液的pH，萃取后得到含有生物蝶呤的水相；2)用反相高效液相色谱对所述含生物蝶呤的水相进行检测；其中，反相高效液相色谱采用等度洗脱，流动相为甲醇和水。本发明实施例所提供的海洋水体中生物蝶呤含量的检测方法通过特定条件的前处理，有效提升检测灵敏度，使检测限进一步缩小，能够适应海洋水体含量较低的现状，具有较高的精准性，对于揭示生物蝶呤在海洋浮游生物中尤其是微型生物生命活动的调控过程、加强对海洋化学的理解具有重要意义。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其是涉及一种海洋水体中生物蝶呤的检测方法。

背景技术

生物蝶呤(Biopterin，BTP)是三磷酸鸟苷(GTP)代谢产物，控制GTP转化成蝶呤的GTP环水解酶I在原核生物和真核生物中均有发现。自然界中，从细菌到高等动植物(除昆虫外)均可合成生物蝶呤。生物蝶呤作为70多种酶类的内源性辅酶因子，参与动植物、细菌和真菌的生命活动过程。生物蝶呤是包括固氮酶类、一氧化氮合成酶、硝酸盐还原酶、亚硫酸氧化酶、一氧化碳氧化还原酶、苯丙氨酸羟化酶、酪氨酸羟化酶、色氨酸羟化酶以及叶酸、维生素等合成代谢过程的必需辅酶因子，具有重要的生理功能，在海洋碳氮循环中至关重要。

医学研究发现，生物蝶呤在生物体内一系列生理和病理过程中起关键作用。还原性生物蝶呤在哺乳类动物中起芳香族氨基酸的辅基作用，此外在人体中还具有抗氧化和清除活性氮氧化物的功能。与生物蝶呤在医学上趋于成熟的研究相比，海洋生物，特别是海洋浮游生物中有关生物蝶呤定量的研究目前在国际上尚未见诸报道。此前研究发现生物蝶呤-α-葡糖苷在蓝藻生长过程中抵御紫外辐射的危害效果显著，为了揭示生物蝶呤在海洋浮游生物中的生命活动的调控过程，加强对海洋化学的理解，有必要提供一种针对海洋水体中微型生物的生物蝶呤的检测方法，而目前的困难之一在于海洋水体中的生物蝶呤含量极低，常规的检测方法难以使用。根据现今存在的问题，提出一种海洋水体中生物蝶呤含量的检测方法成为亟需解决的问题。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种海洋水体中生物蝶呤的检测方法。

第一方面，本发明的一个实施例提供了一种海洋水体中生物蝶呤的检测方法，包括以下步骤：

1)前处理：水样过滤后弃滤液，取颗粒物并加入细胞裂解液破碎，得到溶出液；调节所述溶出液的pH，萃取后得到含有生物蝶呤的水相；

2)用反相高效液相色谱对含有生物蝶呤的水相进行检测；

其中，反相高效液相色谱采用等度洗脱，流动相为甲醇和水。

本发明实施例的海洋水体中生物蝶呤含量的检测方法至少具有如下有益效果：

本发明实施例开发建立了一种针对性的生物蝶呤测定方法，通过特定条件的前处理，有效提升检测灵敏度，使检测限进一步缩小，能够适应海洋水体含量较低的现状，具有较高的精准性，同时结合高通量的反相高效液相色谱有利于获得真实、准确的数据，对于揭示生物蝶呤在海洋浮游生物中尤其是微型生物生命活动的调控过程、加强对海洋化学的理解具有重要意义。

根据本发明的一些实施例的海洋水体中生物蝶呤的检测方法，基于流动相的总体积，甲醇的体积为5％至15％，水的体积为85％至95％。通过特定比例范围条件的流动相设置，使得流动相系统粘度较小，过柱时具有更好的柱效，样品中的生物蝶呤具有更高的分离效率。

根据本发明的一些实施例的海洋水体中生物蝶呤的检测方法，流动相中甲醇和水的体积比为10：90。依此比例设置的流动相能够进一步提高检测灵敏度和精度。

根据本发明的一些实施例的海洋水体中生物蝶呤的检测方法，等度洗脱时，色谱柱柱温为25℃至30℃，流动相的流速为0.6mL/min至0.8mL/min。