[发明专利]水产品中孔雀石绿残留量的快速定量分析方法及试剂盒

权利要求书

1.水产品中孔雀石绿残留量的快速定量分析方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）混合标准溶液的配制：取孔雀石绿标准物质用乙腈溶解得到浓度为100µg/mL的孔雀石绿标准储备液，取隐色孔雀石绿标准物质用乙腈溶解得到浓度为100µg/mL的隐色孔雀石绿标准储备液，然后分别取孔雀石绿标准储备液和隐色孔雀石绿标准储备液各20µL于同一个20mL的容量瓶中，用乙腈稀释并定容至20mL，得到混合标准溶液；

（2）混合内标标准溶液的配制：分别取浓度为200µg/mL的氘代孔雀石绿标准溶液和浓度为200µg/mL的氘代隐色孔雀石绿标准溶液于同一个容量瓶中，然后用乙腈稀释定容得到混合内标标准溶液，并置于-18℃下避光保存；

（3）混合标准工作溶液的配制：取不同体积的混合标准溶液于不同的容量瓶中，接着每个容量瓶中加入混合内标标准溶液，然后用提取剂B稀释定容，配制成一系列浓度梯度的混合标准工作溶液，每个浓度梯度的混合标准工作液中氘代孔雀石绿和氘代隐色孔雀石绿的浓度均位于混合标准工作溶液的浓度梯度范围内；所述提取剂B为酸化乙腈；

（4）提取剂A的配制：用重蒸馏水溶解无水乙酸铵配制得到摩尔浓度为2.5mol/L的乙酸铵溶液作为提取剂A；

（5）提取：取水产品可食部位绞碎后制成样品，称取2.00g～5.00g样品于50mL离心管中，加入5～10mL提取剂C，混匀，再加入提取剂B，所述提取剂B和提取剂C的添加量之和为15～25mL，先均质，然后再超声提取或者振荡提取10～15min； 所述提取剂C是取提取剂A，用去离子水稀释，然后分别等体积加入氘代孔雀石绿标准溶液、氘代隐色孔雀石绿标准溶液，再用去离子水定容得到提取剂C；

所述提取剂C中各组分的配比可以根据以下式（1）、式（2）和式（3）联合计算得到：

式（1）、（2）、（3）中，V₁ 为氘代孔雀石绿标准溶液或氘代隐色孔雀石绿标准溶液的添加体积，单位为mL；V₂为提取剂C定容后的体积，单位为mL；V₃为提取剂A的添加体积，单位为mL；V_B为步骤（5）中提取剂B的添加体积，单位为mL；V_C为步骤（5）中提取剂C的添加体积，单位为mL；200为氘代孔雀石绿标准溶液或氘代隐色孔雀石绿标准溶液的浓度，单位为µg/mL；C₁为混合标准工作溶液中的氘代孔雀石绿或氘代隐色孔雀石绿的浓度，单位为µg/mL；V_D为步骤（5）中添加的提取剂C和提取剂B的体积之和；500为提取剂C定容后的体积与提取剂A的添加体积的比值；

（6）净化：将经过步骤（5）处理后的离心管置于离心机中，在转速为2000～8000r/min的条件下离心5～10min，然后取上清液经微孔滤膜过滤后得到待测样品溶液；

（7）测定：使用液相色谱-串联质谱仪分别测定待测样品溶液和一系列浓度梯度的混合标准工作溶液，以孔雀石绿的峰面积与氘代孔雀石绿的峰面积的比值为纵坐标，孔雀石绿的质量浓度为横坐标进行回归分析，计算得到待测样品溶液中孔雀石绿的浓度，以隐色孔雀石绿的峰面积与氘代隐色孔雀石绿的峰面积的比值为纵坐标，隐色孔雀石绿的质量浓度为横坐标进行回归分析，计算得到待测样品溶液中隐色孔雀石绿的浓度，然后再按照如下式（4）计算得到样品中孔雀石绿或隐色孔雀石绿药物残留的含量，计算结果需扣除空白值，

式（4）中，X为样品中孔雀石绿或隐色孔雀石绿药物残留的含量，单位为µg/kg；C为待测样品溶液中孔雀石绿或隐色孔雀石绿的浓度，单位为ng/mL；V为待测样品溶液的测定体积，单位为mL；m为样品的质量，单位为g。

2.根据权利要求1所述水产品中孔雀石绿残留量的快速定量分析方法，其特征在于：所述提取剂B为酸化乙腈，其具体是按照无水甲酸与乙腈为1:999的体积比将无水甲酸和乙腈混合得到的。

3.根据权利要求1所述水产品中孔雀石绿残留量的快速定量分析方法，其特征在于：所述孔雀石绿标准物质和隐色孔雀石绿标准物质的纯度均大于98%。