[发明专利]胰岛素样生长因子2在促进人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞中的应用

权利要求书

1.体外诱导人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，将人皮肤成纤维细胞于基础培养基中进行体外培养，待细胞汇合度达50-70％，加入终浓度为50-200ng/ml的胰岛素样生长因子2，对细胞预处理12-48小时，然后进行诱导分化；

诱导分化的步骤包括：将培养基换成诱导分化培养基①，培养6-10天，每两天换液一次；然后，将诱导分化培养基①换成诱导分化培养基②，培养2-4天；最后，将诱导分化培养基②换成基础培养基，培养8-14天，每两天换液一次；

其中，所述基础培养基为含10-20％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的高糖DMEM培养基；

所述诱导分化培养基①为含0.5-1μM地塞米松、10-20μg/mL胰岛素、1-2μM罗格列酮和0.2-0.5mM 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的基础培养基；

所述诱导分化培养基②为含10-20μg/mL胰岛素的基础培养基。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导分化培养基①为含1μM地塞米松、20μg/mL胰岛素、2μM罗格列酮和0.5mM 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的基础培养基。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导分化培养基②为含20μg/mL胰岛素的基础培养基。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，胰岛素样生长因子2的终浓度为50ng/ml、100ng/ml或200ng/ml。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将人皮肤成纤维细胞于基础培养基中进行体外培养并传至10代以内，待细胞汇合度达50-70％，加入终浓度为50-200ng/ml的胰岛素样生长因子2，对细胞预处理24小时；然后，将培养基换成诱导分化培养基①，培养6天，每两天换液一次；然后，将诱导分化培养基①换成诱导分化培养基②，培养2天；最后，将诱导分化培养基②换成基础培养基，培养8天，每两天换液一次；

其中，所述基础培养基为含20％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的高糖DMEM培养基；

所述诱导分化培养基①为含1μM地塞米松、20μg/mL胰岛素、2μM罗格列酮和0.5mM 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的基础培养基；

所述诱导分化培养基②为含20μg/mL胰岛素的基础培养基。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，细胞培养条件为：35℃～37℃，5％CO₂。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，细胞培养条件为：37℃，5％CO₂。