[发明专利]胰岛素样生长因子2在促进人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞中的应用

说明书

本发明提供胰岛素样生长因子2在促进人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞中的应用，其是将人皮肤成纤维细胞在进行体外诱导分化之前，用终浓度为50‑200ng/ml的胰岛素样生长因子2对细胞进行预处理。本发明在原有“6+2+8”诱导分化模式的基础上，通过胰岛素样生长因子2的预处理，显著地提高了人皮肤成纤维细胞分化成脂肪细胞的效率。采用本方法可以高效地将人皮肤成纤维细胞诱导分化成脂肪细胞，为临床上的皮肤创伤愈合、疤痕修复以及脂营养不良症的治疗提供了新思路、新方法。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及胰岛素样生长因子2在促进人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞中的应用。

背景技术

CN201910876049.6公开了一种体外诱导人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法，利用此法人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞的效率相对较低，很难在临床上广泛用于创伤修复、疤痕修复以及脂营养不良症治疗等。

发明内容

本发明的目的是提供胰岛素样生长因子2在促进人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞中的应用。

本发明的另一目的是提供一种高效地体外诱导人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供胰岛素样生长因子2在促进人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞中的应用。

所述应用包括：人皮肤成纤维细胞在进行体外诱导分化之前，用终浓度为50-200ng/ml(优选50ng/ml、100ng/ml或200ng/ml)的胰岛素样生长因子2对细胞进行预处理。

第二方面，本发明提供体外诱导人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法，将人皮肤成纤维细胞于基础培养基中进行体外培养，待细胞汇合度达50-70％，加入终浓度为50-200ng/ml(优选50ng/ml、100ng/ml或200ng/ml)的胰岛素样生长因子2，对细胞预处理12-48小时(优选24小时)，然后进行诱导分化；

诱导分化的步骤包括：将培养基换成诱导分化培养基①，培养6-10天，每两天换液一次；然后，将诱导分化培养基①换成诱导分化培养基②，培养2-4天；最后，将诱导分化培养基②换成基础培养基，培养8-14天，每两天换液一次；

其中，所述基础培养基为含10-20％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的高糖DMEM培养基；

所述诱导分化培养基①为含0.5-1μM地塞米松、10-20μg/mL胰岛素、1-2μM罗格列酮和0.2-0.5mM 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的基础培养基；

所述诱导分化培养基②为含10-20μg/mL胰岛素的基础培养基。

优选地，所述基础培养基为含20％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的高糖DMEM培养基。

优选地，所述诱导分化培养基①为含1μM地塞米松、20μg/mL胰岛素、2μM罗格列酮和0.5mM 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的基础培养基。

优选地，所述诱导分化培养基②为含20μg/mL胰岛素的基础培养基。

上述培养基最好现配现用，避免药物的有效成分降解。

在本发明的一个具体实施方式中，体外诱导人皮肤成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法包括：将人皮肤成纤维细胞于基础培养基中进行体外培养并传至10代以内(优选2-7代，更优选7代)，待细胞汇合度达50-70％，加入终浓度为50-200ng/ml(优选50ng/ml、100ng/ml或200ng/ml，更优选200ng/ml)的胰岛素样生长因子2，对细胞预处理24小时；然后，将培养基换成诱导分化培养基①，培养6天，每两天换液一次；然后，将诱导分化培养基①换成诱导分化培养基②，培养2天；最后，将诱导分化培养基②换成基础培养基，培养8天，每两天换液一次；