[发明专利]一种基于超速PCR与功能核酸显色的定量检测方法

权利要求书

1.一种基于超速PCR的非诊断目的的沙门氏菌定量检测方法，其特征在于使用超速PCR方法扩增靶标序列，并包括显色反应；

PCR反应体系中包括上游引物、下游引物、DNA聚合酶；

所述上游引物为：GGGATGGGCGGGTT-oxyethyleneglycol-GGCATGTCTGCGCACTTC；

所述下游引物为：GGGCGGGTTGGGTT-oxyethyleneglycol-TCCGCCCTGTCTACTTAT；

或所述上游引物为：GGGATGGGCGGGTT-oxyethyleneglycol-GTGCTCGTTTACGACCTGA；

所述下游引物为：GGGCGGGTTGGGTT- oxyethyleneglycol-CCCTTTGCGAATAACATCC；

所述显色反应是在氯高铁血红素hemin的诱导下，催化2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二胺盐ABTS^2-与过氧化氢H₂O₂生成使反应液呈蓝绿色的物质ABTS^-；

所述oxyethyleneglycol的化学结构为：

，

所述DNA聚合酶是KAPA2G FAST DNA聚合酶。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述PCR反应体系中，还包含金纳米颗粒；所述金纳米颗粒终浓度为0.1-0.5 nM。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，上游引物浓度为1-5μM、下游引物浓度为1-5μM，KAPA2G FAST DNA聚合酶浓度为1-5 U/μL。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，超速PCR反应的反应过程包括： 95-98℃，0-10s；50-60℃，0-10s，共25-40个循环。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，超速PCR反应的反应过程包括： 95-98℃，1-5s；50-60℃，1-5s，共25-40个循环。

6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，含有2.5μM的上游引物、2.5μM的下游引物、2 U/μL的聚合酶、0.32 nM的金纳米颗粒。

7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，含有2.5μM的上游引物、2.5μM的下游引物、2 U/μL的聚合酶、0.32 nM的金纳米颗粒。

8.一种靶标序列的快速检测装置，其特征在于，内置权利要求1-7任一所述的检测方法中使用的试剂，还包括：

1）所述的快速检测装置由控制主机、步进电机、机械臂、实时温度监测器、快速热传导功能的反应器与温差容器组成；

2）所述的控制主机通过遥控步进电机控制机械臂运动操控反应温度；

3）所述的步进电机通过携带机械臂、驱动反应器中的反应样品在不同的温度容器之间左右摇摆；反应器内的实时温度监控器能够快速导热，实时感知反应温度；

4）所述的快速检测装置能够实现10分钟内完成30个热循环扩增；

其中所述内置试剂包括权利要求1-7中PCR反应体系中的上游引物、下游引物、DNA聚合酶，显色反应中的氯高铁血红素、ABTS^2-和H₂O₂。