[发明专利]一种无RNA污染的植物基因组DNA高效提取方法

权利要求书

1.一种无RNA污染的植物基因组DNA高效提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)2％CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热；

(2)取1g叶片置于研钵中，用液氮磨至粉状，将300mg的粉末转移到2.0ml离心管中；

(3)加入800μl 2％CTAB抽提缓冲液和20μl 1％β-巯基乙醇，轻轻搅动混匀；

(4)置于65℃的水浴槽或恒温箱中温浴，每隔10min轻轻摇动，30min后取出；

(5)加入800μl酚/氯仿/异戊醇，在摇床上以90rpm/min的速度充分混匀10min后，12000rpm离心5min；

(6)离心结束后，吸取500μl上清液，转入另一新的2.0ml离心管中；

(7)在500μl上清液中加入10μl浓度为10mg/ml的RNaseA溶液，在摇床上充分混匀，以去除RNA；

(8)15min后，加入500μl酚/氯仿/异戊醇，摇床上充分混匀；

(9)混匀10min后，12 000rpm离心5min，取上清液至另一新的2.0ml离心管中，在离心管中加等体积已在-20℃冰箱中预冷的异丙醇，置-20℃冰箱冷冻20min；

(10)冷冻20min后，12 000rpm离心2min，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上；

(11)2min后，直立离心管，加入800μl 75％乙醇，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀于管底的DNA块状物浮游于液体中，漂洗5min；

(12)12 000rpm离心1min，倒掉液体，再加入800μl 75％乙醇，将DNA漂洗5min；

(13)12 000rpm离心1min，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA；

(14)加入100μl灭菌水溶解；

(15)置于-20℃保存、备用。

2.根据权利要求1所述的无RNA污染的植物基因组DNA高效提取方法，其特征在于，步骤6中，在第一次抽提的上清液中加入RNaseA溶液消解RNA。