[发明专利]一种无RNA污染的植物基因组DNA高效提取方法

说明书

本发明公开了一种无RNA污染的植物基因组DNA高效提取方法，CTAB抽提缓冲液水浴中预热；叶片置于研钵中，研磨；加入抽提缓冲液和β‑巯基乙醇；温浴；加入酚/氯仿/异戊醇，在摇床上充分混匀后离心；轻轻地吸取上清液，在上清液中加入RNaseA溶液，去除RNA；加入酚/氯仿/异戊醇；离心取上清液，在离心管中加等体积已预冷的异丙醇，冷冻；离心，立即倒掉液体；直立离心管，加入乙醇；倒掉液体，再加入乙醇，将DNA漂洗；离心，立即倒掉液体，干燥DNA；灭菌水溶解；置于‑20℃保存、备用。本发明以水稻叶片为材料，通过改进基因组DNA提取方法，在提取时间、DNA提取量、RNA残留等方面具有较大优势。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种无RNA污染的植物基因组DNA高效提取方法。

背景技术

在分子生物学和遗传学领域，基因组是指生物体所有遗传物质的总和。这些遗传物质包括DNA或RNA(病毒RNA)。基因组包括编码DNA和非编码DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA。研究基因组DNA，要求提取的DNA具有较高的纯度和得率，以便于PCR、基因组测序以及基因探测等后续研究。在DNA提取过程中，影响其纯度和得率的原因很多。

现有技术中，急需一种无RNA污染的植物基因组DNA高效提取方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种无RNA污染的植物基因组DNA高效提取方法。

其具体技术方案为：

一种无RNA污染的植物基因组DNA高效提取方法，包括以下步骤：

(1)2％CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。

(2)取少量叶片(约1g)置于研钵中，用液氮磨至粉状，将300mg左右的粉末转移到2.0ml离心管中。

(3)加入800μl 2％CTAB抽提缓冲液和20μl 1％β-巯基乙醇，轻轻搅动混匀。

(4)置于65℃的水浴槽或恒温箱中温浴，每隔10min轻轻摇动，30min后取出。

(5)加入800μl酚/氯仿/异戊醇(25/24/1)，在摇床(90rpm/min)上充分混匀10min后，12 000rpm离心5min。

(6)离心结束后，吸取500μl上清液，转入另一新的2.0ml离心管中。

(7)在500μl上清液中加入10μl RNaseA溶液(10mg/ml)，在摇床上充分混匀，去除RNA。

(8)混匀15min后，加入500μl酚/氯仿/异戊醇，摇床上充分混匀；

(9)混匀10min后，12 000rpm离心5min，取上清液至另一新的2.0ml离心管中，在离心管中加等体积已在-20℃冰箱中预冷的异丙醇，置-20℃冰箱冷冻20min。

(10)冷冻20min后，12 000rpm离心2min，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上。

(11)2min后，直立离心管，加入800μl 75％乙醇，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀于管底的DNA块状物浮游于液体中，漂洗5min。

(12)12 000rpm离心1min，倒掉液体，再加入800μl 75％乙醇，将DNA漂洗5min。

(13)12 000rpm离心1min，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA。

(14)加入100μl灭菌水溶解。

(15)置于-20℃保存、备用。