[发明专利]一种引导耐热甘露聚糖酶分泌表达的改造信号肽、重组质粒、基因工程菌、生产方法和应用有效
| 申请号： | 202010270626.X | 申请日： | 2020-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN111471087B | 公开（公告）日： | 2021-09-07 |
| 发明（设计）人： | 张莉;邓香连;熊海容;姚银;闵琪;谭玉青 | 申请（专利权）人： | 中南民族大学 |
| 主分类号： | C07K7/08 | 分类号： | C07K7/08;C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12N9/24;A23K10/18;C12R1/84 |
| 代理公司： | 武汉华旭知识产权事务所 42214 | 代理人： | 刘荣 |
| 地址： | 430074 湖北省武汉*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 引导 耐热 甘露 聚糖 分泌 表达 改造 信号肽 重组 质粒 基因工程 生产 方法 应用 | ||
1.一种引导耐热甘露聚糖酶分泌表达的改造信号肽，其特征在于：所述改造信号肽的氨基酸序列为在SEQ ID NO:1第二位和第三位氨基酸之间添加精氨酸的序列或SEQ ID NO:1倒数第一位和第二位氨基酸之间添加赖氨酸的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的引导耐热甘露聚糖酶分泌表达的改造信号肽，其特征在于：所述改造信号肽氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示、核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示或所述改造信号肽氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示、核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
3.根据权利要求2所述的引导耐热甘露聚糖酶分泌表达的改造信号肽，其特征在于：所述耐热甘露聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，核苷酸序列如GeneBank AccessionNo.KJ806637所示。
4.一种含有权利要求1所述改造信号肽的重组质粒，其特征在于：所述含有改造信号肽的重组质粒是通过将改造信号肽的编码基因替换表达载体中信号肽基因获得。
5.根据权利要求4所述的含有改造信号肽的重组质粒，其特征在于：所述表达载体为pPIC9K、pPICZαA、pPICZαB、pPICZαC、pGAPZαA、pGAPZαB、pGAPZαC中的任一种。
6.一种含有权利要求1所述改造信号肽的引导耐热甘露聚糖酶分泌表达的重组质粒，其特征在于：所述引导耐热甘露聚糖酶分泌表达的重组质粒是通过将耐热甘露聚糖酶核苷酸序列插入到含有改造信号肽的重组质粒多克隆位点处获得。
7.一种含有权利要求6所述重组质粒的产耐热甘露聚糖酶的基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌是通过将引导耐热甘露聚糖酶分泌表达的重组质粒转化至酵母宿主细胞获得。
8.根据权利要求7所述的产耐热甘露聚糖酶的基因工程菌，其特征在于：所述宿主细胞为Pichia pastoris SMD1168、Pichia pastoris GS115、Pichia pastoris X-33、Pichiapastoris KM71中的任一种。
9.一种根据权利要求7所述的基因工程菌生产耐热甘露聚糖酶的方法，其特征在于：利用产耐热甘露聚糖酶的基因工程菌在28-30℃条件下发酵5-7天获得。
10.根据权利要求7所述的产耐热甘露聚糖酶的基因工程菌在饲用酶制剂和纺织用酶制剂方面的应用。
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