[发明专利]一种检测miRNA-141的生物传感器及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种检测miRNA-141的生物传感器，其特征在于，包括复合探针S、AgNCs-DNA、miRNA-141、S4、H1、H2、buffer；

所述的复合探针S是S3与S1、S2杂交成双链形成的；

所用到的碱基序列为：

H1碱基序列如SEQ No.1所示；具体为:5’-GTCTTG-GTTAGATCGCCAAGGTTTCTGTAGCTACGACGATCAGACCTTGGCGAGTCGTAGCTACAGAAACCTTGGCGA-3’；

H2碱基序列如SEQ No.2所示；具体为:5’-ACCTTGGCGAGTCGTAGCTACAGAAACCTTGGCGATCTAACTTCTGTAGCTACGACTCGCCAAGGT-CTGATCCAAGAC-3’

AgNCs-DNA碱基序列如SEQ No.3所示；具体为:5’-CCCACCCACCCGCCCAAGTCTTGTCGCCAAGGTCAAGAC-BHQ1-3’

S2碱基序列如SEQ No.4所示；具体为:5’-GTCGTAGCTACAGAAACCTTGGCGATCTAAC-3’

S3碱基序列如SEQ No.5所示；具体为:5’-gatcgccaaggt-ttctgtagctacgacgggat-ccatctttaccagacagtgtta-3’

S1碱基序列如SEQ No.6所示；具体为: 5’-tctggtaaagatggatccc-3’

S4碱基序列如SEQ No.7所示；具体为:5’-tctggtaaagatggatcccgtcgtagctacagaaaccttggcgatc-3’

miRNA-141碱基序列如SEQ No.8所示；具体为: 5’-uaacacugucugguaaagaugg-3’；

所述AgNCs-DNA的3’连接有-BHQ1。

2.权利要求1所述的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）复合探针S的制备：S3事先与S1、S2杂交成双链，形成复合探针S；

（2）使用发夹AgNCs-DNA链制备纳米银簇AgNCs：

（3）将miRNA-141、S4、S、AgNCs-DNA、H1、H2、buffer、水混合，反应；

（4）加入步骤（2）制备的纳米银簇AgNCs-DNA，荧光检测。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）的过程为：将S3和S1、S2、buffer、水混合均匀，95℃下反应3min，然后慢慢冷却到室温。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）纳米银簇AgNCs的制备，方法如下：向PB缓冲溶液，加入H2、AgNO₃，混匀后4℃放置15-30min，加入现配的NaHBO₄，震荡1min，4℃放置4h以上。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（3）过程为：取S、S4、H1、H2、buffer、miRNA-141、水混合均匀，在37℃下反应1.2h。