[发明专利]一种检测miRNA-141的生物传感器及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及基于荧光强度变化与链置换反应与杂交链式反应辅助的循环放大的生物传感器。为了解决以上现有技术中检测miRNA‑141的方法特异性和灵敏度都比较低、成本高的问题。一种基于荧光检测miRNA‑141的生物传感器，将荧光强度变化与链置换反应与杂交链式反应辅助的循环放大相结合，均相反应混合液。制备方法：合成银簇；miRNA‑141、S4、S、AgNCs‑DNA、H1、H2在均相体系中混合反应。利用链置换反应辅助的循环放大，实现Trigger的循环利用，起到了信号放大的作用。

技术领域

本发明属于生物传感器技术领域，涉及一种检测miRNA-141的生物传感器及其制备方法与应用，具体涉及基于链置换反应和杂交链式反应双重信号循环放大及银簇荧光强度变化检测miRNA-141的生物传感器及其制备方法与应用。

背景技术

MicroRNAs（miRNAs）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20-25个核苷酸。人体中大部分miRNAs通过与靶基因miRNAs的3’端非转录区域碱基互补完全或不完全配对的形式来抑制miRNA的翻译，并诱导miRNA的切割降解，进一步由细胞到个体的各个水平上影响人体的生长发育，同时参与包括肿瘤在内的多种疾病过程。miRNA-141，其核酸链碱基顺序是5’- UAACACUGUCUGGUAAAGAUGG-3’。研究表明，miRNA-141 的异常表达与细胞增殖、凋亡、分化、个体发育以及前列腺癌发展、侵袭、转移密切相关。这为前列腺癌、前列腺增生生物标志物的寻找提供了一个新的途径。

目前报道的MiRNA的检测方法主要有定量逆转录-聚合酶链式反应（qRT—PCR）和Northern blotting 法、克隆测序法、实时荧光定量PCR等，但实时荧光定量PCR对温度和仪器要求较高，专业技术要求高；Northern blotting法耗时、过程复杂、检测灵敏度不高，克隆测序法也是耗时耗力。因此，目前急需建立一种快速，准确，灵敏且高特异性的检测方法来检测miRNA-141。

发明内容

为了解决以上现有技术中检测miRNA-122的方法特异性和灵敏度都比较低、成本高、检测周期长的问题，本发明提供了一种特异性和灵敏度高、成本低、检测速度快的，基于链置换反应和杂交链式反应双重信号循环放大及银簇荧光强度变化检测miRNA-141的生物传感器，同时本发明还提供了基于链置换反应和杂交链式反应双重信号循环放大及银簇荧光强度变化检测miRNA-141的生物传感器的制备方法及应用。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种检测miRNA-141的生物传感器，包括复合探针S、AgNCs-DNA、miRNA-141、S4、H1、H2、buffer；

所述的复合探针S是S3与S1、S2杂交成双链形成的；

所用到的碱基序列为：

H1碱基序列如SEQ No.1所示；具体为:5’-GTCTTG-GTTAGATCGCCAAGGTTTCTGTAGCTACGACGATCAGACCTTGGCGAGTCGTAGCTACAGAAACCTTGGCGA-3’；

H2碱基序列如SEQ No.2所示；具体为:5’-ACCTTGGCGAGTCGTAGCTACAGAAACCTTGGCGATCTAACTTCTGTAGCTACGACTCGCCAAGGT-CTGATCCAAGAC-3’