[发明专利]MicroRNA微纳米球的制备方法及其在脊髓损伤修复中的应用

说明书

本发明公开了一种MicroRNA微纳米球的制备方法，包括：采用复乳法制备聚乳酸‑羟基乙酸共聚物微纳米球溶液；将聚醚酰亚胺水溶液加入到聚乳酸‑羟基乙酸共聚物微纳米球溶液充分振荡混匀形成聚醚酰亚胺修饰的聚乳酸‑羟基乙酸共聚物微纳米球复合物溶液；将不同的MicroRNAs负载到微球上，形成MicroRNAs微球复合物。本发明通过生物高分子聚乳酸‑羟基乙酸共聚物微纳米球结合调控多种MicroRNA表达，脊髓损伤后形成有利于再生的局部微环境，促进脊髓损伤后修复。

技术领域

本发明涉及一种MicroRNA微纳米球的制备方法及其在脊髓损伤修复中的应用，属于生物医学技术领域。

背景技术

脊髓损伤(spinal cord injury)是一种严重的中枢神经系统性创伤，呈现高发生率、高死亡率、高致残率的特征，随着我国现代经济社会和交通建筑事业发展，发病率逐年上升，每年新增病例超过6万人，给患者以及社会带来沉重负担。脊髓损伤病理发展过程是一个多因素多步骤参与的综合网络调控过程，大致可分为两个阶段：第一阶段是脊髓的直接损伤，即突然压迫下感觉、运动和自主神经功能即刻丢失，其本质是脊髓灰质和灰质内微血管受损而引发；第二阶段主要来自脊髓白质受损，在损伤最初几分钟内出现血管和代谢障碍，几小时后信号分子离子通道改变导致神经递质变化以及脂质过氧化，数周后进一步发展出现炎症细胞级联反应以及神经细胞凋亡，最终由于脱髓鞘病变和胶质瘢痕形成导致白质纤维素损伤。

microRNAs(miRNAs)是一类能够调控靶基因表达的小分子RNA，在脊髓损伤导致的继发性损伤和局部再生过程中都扮演着重要角色，近年来已经成为脊髓损伤后神经修复和再生的治疗性干预新靶点。目前，microRNA在脊髓损伤临床应用的报道仍然比较有限，仍有问题需要解决，例如缺乏分子机制之间的相互联系，揭示相关microRNA在脊髓损伤中的调控网络与调控模式。

脊髓损伤治疗策略的另一个主要限制是药物运输系统。高分子微球是天然高分子材料为载体包裹或吸附药物制备的粒径在1-500μm之间的微小球状实体，可降解的天然高分子材料具有安全无毒、易修饰等特性近年来备受关注。并且由于具有侵袭性小，提供持续的局部药物释放，避免全身应用可能产生的副作用，避免使用病毒载体，注射剂量的个性化以及生物可降解性等优点，已经成为治疗脊髓损伤的药物运输新途径。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种MicroRNA微纳米球的制备方法及其在脊髓损伤修复中的应用，通过生物高分子聚乳酸-羟基乙酸共聚物微纳米球结合调控多种MicroRNA表达，脊髓损伤后形成有利于再生的局部微环境，促进脊髓损伤后修复。

为解决上述技术问题，本发明提供一种MicroRNA微纳米球的制备方法，包括：

采用复乳法制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物微纳米球溶液；

将聚醚酰亚胺水溶液加入到聚乳酸-羟基乙酸共聚物微纳米球溶液充分振荡混匀形成聚醚酰亚胺修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微纳米球复合物溶液；

将不同的MicroRNAs负载到微球上，形成MicroRNAs微球复合物。

进一步地，所述的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微纳米球溶液的具体制备方法为：

将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于二氯甲烷中得到10％的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液，同时分别制备7％和1％的聚乙烯醇水溶液；

将10％的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液和7％聚乙烯醇溶液混合并超声产生乳状液，然后将乳状液加入1％的聚乙烯醇溶液继续超声，并持续搅拌以去除二氯甲烷，最后用双蒸水洗涤，并重悬于双蒸水中保存，得到聚乳酸-羟基乙酸共聚物微纳米球溶液。