[发明专利]一种胶体金法检测新型冠状病毒IgM的检测卡及其制备方法在审
申请号: | 202010272173.4 | 申请日: | 2020-04-09 |
公开(公告)号: | CN111693713A | 公开(公告)日: | 2020-09-22 |
发明(设计)人: | 周成林;朱莉;徐娟;张越;李旺;彭海林;杨洋;韩俊岭;胡海涛 | 申请(专利权)人: | 泰州市人民医院 |
主分类号: | G01N33/68 | 分类号: | G01N33/68;G01N33/58;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/531 |
代理公司: | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人: | 柏尚春 |
地址: | 225300 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 胶体 检测 新型 冠状病毒 igm 及其 制备 方法 | ||
1.一种胶体金法检测新型冠状病毒IgM的检测卡,其特征在于:包括样品垫(5)、反应垫(4)和硝酸纤维素膜(2);在所述硝酸纤维素膜(2)上划有相平行的检测线和质控线,所述检测线上包被有新型冠状病毒重组抗原,所述质控线上包被有新型冠状病毒羊多抗IgG,在所述硝酸纤维素膜(2)上固定反应垫(4),反应垫(4)上标记有新型冠状病毒鼠抗人IgM抗体,在所述反应垫(4)上固定样品垫(5)。
2.根据权利要求1所述胶体金法检测新型冠状病毒IgM的检测卡,其特征在于:所述检测卡还包括检测卡壳、底板(1)和吸水纸(3),在所述底板(1)的中部固定硝酸纤维素膜(2),在所述硝酸纤维素膜(2)的右部固定吸水纸(3),所述底板(1)、样品垫(5)、反应垫(4)、硝酸纤维素膜(2)和吸水纸(3)组成的试剂条放置在检测卡壳中,样品垫(5)放置在检测卡壳加样孔端。
3.一种权利要求1所述检测线和质控线的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:在硝酸纤维素膜(2)上用浓度为0.5-1.5mg/mL的新型冠状病毒重组抗原点样划线包被得到检测线,在硝酸纤维素膜(2)上用浓度为0.5-1.5mg/mL的新型冠状病毒羊多抗IgG点样划线包被得到质控线;将划有检测线和质控线的硝酸纤维素膜(2)用封闭液在22-38℃下浸泡封闭15-40分钟后风干。
4.根据权利要求3所述检测线和质控线的制备方法,其特征在于:所述检测线和质控线的粗细为0.4-1.2mm,所述检测线或质控线的点样量按4-8mm宽的检测卡上点样0.8-1.6μL。
5.根据权利要求3所述检测线和质控线的制备方法,其特征在于:所述封闭液包括磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白和吐温20,所述磷酸盐缓冲液浓度为9-11mmol/L、pH为7.1-7.4,所述牛血清白蛋白的质量分数为0.9-1.1%,所述吐温20的质量分数为0.09-0.12%。
6.一种权利要求1所述反应垫的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
第一步,配制浓度为0.005-0.015%的氯金酸溶液,将所述氯金酸溶液煮沸后,按每100mL氯金酸溶液中加入0.8-1.2%的柠檬酸三钠溶液2.5-3.5mL,继续煮沸,待冷却至室温后,用90-110mmol/L碳酸钾溶液调pH至8.0-8.4,得到胶体金溶液;
第二步,在100mL胶体金溶液中加入550-650μg新型冠状病毒鼠抗人IgM抗体,搅拌、静置,然后加入浓度为0.8-1.2%牛血清白蛋白搅拌,离心、过滤,所得沉淀为胶体金标记鼠抗人IgM抗体;
第三步,在胶体金标记鼠抗人IgM抗体中加水稀释至0.8-4mg/mL,稀释后按35-45μL/cm2均匀喷涂于玻璃纤维素膜上,冷冻真空干燥后得到反应垫。
7.根据权利要求6所述反应垫的制备方法,其特征在于:第一步中,所述继续煮沸时间为80-120秒。
8.根据权利要求6所述反应垫的制备方法,其特征在于:第二步中,所述离心转速为11000-13000rpm。
9.根据权利要求6所述反应垫的制备方法,其特征在于:第二步中,所述静置为在3-5℃条件下静置。
10.根据权利要求6所述反应垫的制备方法,其特征在于:第三步中,所述冷冻真空干燥在温度为-22~-18℃、真空度为190-210Pa下进行。
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