[发明专利]一种胶体金法检测新型冠状病毒IgM的检测卡及其制备方法

说明书

本发明公开了一种胶体金法检测新型冠状病毒IgM的检测卡及其制备方法，包括样品垫、反应垫和硝酸纤维素膜；在硝酸纤维素膜上划有相平行的检测线和质控线，检测线上包被有新型冠状病毒重组抗原，质控线上包被有新型冠状病毒羊多抗IgG，在硝酸纤维素膜上固定反应垫，反应垫上标记有新型冠状病毒鼠抗人IgM抗体，在反应垫上固定样品垫，并提供该检测卡的制备方法，本发明的检测卡具有检测快速、使用简便、价格低廉、结果直观、携带方便、不需要专门仪器设备的特点。

技术领域

本发明涉及一种检测新型冠状病毒IgM的检测卡及其制备方法，尤其涉及一种胶体金法检测新型冠状病毒IgM的检测卡及其制备方法，属于免疫检测技术领域。

背景技术

冠状病毒(Coronaviruses)为单股正链RNA病毒，分为α、β、γ和δ属四个属。新型冠状病毒能引起病毒性肺炎，临床表现以发热、乏力、干咳为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、咽痛和腹泻等症状。重型病例多在一周后出现呼吸困难和/或低氧血症，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍等。新型冠状病毒IgM抗体是人体感染新型冠状病毒后，首先快速产生和分泌的抗体，早于IgG抗体出现，主要存在于血液中，随着疾病的发展而增加，在经过有效治疗后IgM抗体逐渐消失，IgG抗体则持续存在。

目前对于新型冠状病毒检测的金标准是核酸检测，但核酸检测存在对样本取样质量要求高，检测时间长，需要专业的技术人员、设备和实验室场所。

发明内容

发明目的：本发明的第一目的为提供一种检测快速、使用简便、价格低廉、结果直观、携带方便的胶体金法检测新型冠状病毒IgM的检测卡，本发明的第二目的为提供该检测卡的制备方法。

技术方案：本发明的胶体金法检测新型冠状病毒IgM的检测卡，包括样品垫、反应垫和硝酸纤维素膜；在硝酸纤维素膜上划有相平行的检测线和质控线，检测线上包被有新型冠状病毒重组抗原，质控线上包被有新型冠状病毒羊多抗IgG，在硝酸纤维素膜上固定反应垫，反应垫上标记有新型冠状病毒鼠抗人IgM抗体，在反应垫上固定样品垫。

进一步地，检测卡壳、底板和吸水纸，在底板的中部固定硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜的右部固定吸水纸，底板、样品垫、反应垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成的试剂条放置在检测卡壳中，样品垫放置在检测卡壳加样孔端。

本发明的检测线和质控线的制备方法，包括如下步骤：在硝酸纤维素膜上用浓度为 0.5-1.5mg/mL的新型冠状病毒重组抗原点样划线包被得到检测线，在硝酸纤维素膜上用浓度为0.5-1.5mg/mL的新型冠状病毒羊多抗IgG点样划线包被得到质控线；将划有检测线和质控线的硝酸纤维素膜用封闭液在22-38℃下浸泡封闭15-40分钟后风干。

本发明的反应垫的制备方法，包括如下步骤：

第一步，配制浓度为0.005-0.015％的氯金酸溶液，将氯金酸溶液煮沸后，按每100mL 氯金酸溶液中加入0.8-1.2％的柠檬酸三钠溶液2.5-3.5mL，继续煮沸，待冷却至室温后，用90-110mmol/L碳酸钾溶液调pH至8.0-8.4，得到胶体金溶液；

第二步，在100mL胶体金溶液中加入550-650μg新型冠状病毒鼠抗人IgM抗体，搅拌、静置，然后加入浓度为0.8-1.2％牛血清白蛋白搅拌，离心、过滤，所得沉淀为胶体金标记鼠抗人IgM抗体；

第三步，在胶体金标记鼠抗人IgM抗体中加水稀释至0.8-4mg/mL，稀释后按 35-45μL/cm²均匀喷涂于玻璃纤维素膜上，冷冻真空干燥后得到反应垫。

胶体金法具有即时快速检测，不依赖仪器设备的优势，可以作为新型冠状病毒核酸检测之外的辅助检测手段。