[发明专利]香葱EST-SSR分子标记及其应用

权利要求书

1.一种香葱EST-SSR分子标记，其特征在于，所述香葱EST-SSR分子标记具有如编号为Cluster-10188.0；Cluster-11228.0；Cluster-11382.0；Cluster-11719.0；Cluster-12571.0；Cluster-13488.0；Cluster-13953.0；Cluster-14907.0；Cluster-1547.0；Cluster-1574.0；Cluster-168.0；Cluster-17176.0；Cluster-18261.0；Cluster-18284.1；Cluster-18905.0；Cluster-19764.0；Cluster-19959.3；Cluster-22324.0；Cluster-22847.0；Cluster-24908.0；Cluster-2567.0；Cluster-25807.1；Cluster-2608.10612；Cluster-2608.1143；Cluster-2608.11633；Cluster-2608.12824；Cluster-2608.13377；Cluster-2608.18176；Cluster-2608.19044；Cluster-2608.19078；Cluster-2608.19327；Cluster-2608.19412；Cluster-2608.19628；Cluster-2608.19820；Cluster-2608.20126；Cluster-2608.2015；Cluster-2608.22133所示的序列；各编号对应的香葱EST-SSR分子标记的引物对序列按顺序如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.74所示。

2.香葱的引物组合物，其特征在于，包括SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.74所示的引物组合对。

3.包含权利要求2所述引物组合物的试剂盒。

4.根据权利要求1所述的香葱EST-SSR分子标记或权利要求2所述引物组合物或权利要求3所述的试剂盒的如下任一应用：

(1)在香葱品种鉴定中的应用；

(2)在香葱遗传图谱或分子身份证构建中的应用；

(3)在香葱遗传育种中的应用；

(4)在香葱亲缘关系或遗传多样性分析中的应用。

5.香葱种质资源遗传多样性分析的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取香葱的基因组DNA；

(2)以所述基因组DNA为模板采用权利要求2所述引物组合物进行PCR扩增；

(3)数据分析：对电泳结果进行读带和进行聚类分析。

6.根据权利要求5所述香葱种质资源遗传多样性分析的方法，其特征在于，步骤(2)中引物组合物进行PCR扩增包括：

PCR扩增总体积为14μL：含DNA聚合酶Mix 5μL、上下游引物10μmol/L各1μmol，模板DNA为2μL中含有60ng，加双蒸水补齐到14μL；

扩增程序为DNA 95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃复性45s，35个循环；72℃延伸10min；4℃结束保存；

DNA扩增产物与6×上样液混合，经8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，进行电泳分离，电泳结束后进行银染检测分析。