[发明专利]一种红树基因组DNA的高效提取方法在审
申请号: | 202010274587.0 | 申请日: | 2020-04-09 |
公开(公告)号: | CN111454938A | 公开(公告)日: | 2020-07-28 |
发明(设计)人: | 吴冬晴 | 申请(专利权)人: | 武汉菲沙基因信息有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人: | 周琼 |
地址: | 430000 湖北省武汉市东湖高新技术开发区高新*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 红树 基因组 dna 高效 提取 方法 | ||
1.一种红树基因组DNA的高效提取方法,其特征在于,包括:
(1)液氮研磨红树叶片至粉末;
(2)以去杂质buffer清洗粉末,每次清洗过后离心去上清,直到上清不粘稠为止;
(3)向清洗过后的红树粉末中加入裂解液,60-70℃裂解30-40min获得混合液a;所述裂解液配方为:100mM Tris-HCl(pH 8.0)、20mM EDTA、1.4M NaCl、2%(W/V)CATB、20%(W/V)PVP、0.4%(V/V)β-巯基乙醇;
(4)向混合液a中加入酚、氯仿和异戊醇的混合溶液,充分混匀后离心获得上清液a;
(5)向上清液a加入氯仿和异戊醇的混合溶液,充分混匀后离心获得上清液b;
(6)向上清液b中加入异丙醇,充分混匀后静置、离心获得沉淀a;
(7)乙醇清洗沉淀a获得红树基因组DNA。
2.根据权利要求1所述的一种红树基因组DNA的高效提取方法,其特征在于,所述去杂质buffer的配方为:100mM Tris-HCl(pH 8.0)、5mM EDTA、体积分数为5%甘油、质量分数为10%PEG8000。
3.根据权利要求1所述的一种红树基因组DNA的高效提取方法,其特征在于,控制每克红树叶片粉末加入5-10mL所述的裂解液。
4.根据权利要求1所述的一种红树基因组DNA的高效提取方法,其特征在于,所述步骤(4)加入的酚、氯仿和异戊醇的混合溶液与混合液a等体积,所述酚、氯仿和异戊醇的体积比为25:24:1。
5.根据权利要求1所述的一种红树基因组DNA的高效提取方法,其特征在于,所述步骤(4)离心温度为4-37℃,6000-12000rpm离心5-10min。
6.根据权利要求1所述的一种红树基因组DNA的高效提取方法,其特征在于,所述步骤(5)加入的氯仿和异戊醇的混合溶液与上清液a等体积,所述氯仿和异戊醇的体积比为24:1。
7.根据权利要求1所述的一种红树基因组DNA的高效提取方法,其特征在于,所述步骤(5)离心温度为4-37℃,6000-12000rpm离心5-10min。
8.根据权利要求1所述的一种红树基因组DNA的高效提取方法,其特征在于,所述步骤(6)加入的异丙醇的体积为上清液b的0.7-0.9倍。
9.根据权利要求1所述的一种红树基因组DNA的高效提取方法,其特征在于,所述步骤(6)离心温度为4-37℃,6000-12000rpm离心5-10min。
10.根据权利要求1所述的一种红树基因组DNA的高效提取方法,其特征在于,所述步骤(7)乙醇的体积浓度为75%。
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