[发明专利]胺转氨酶AcATA突变体及其在制备西他列汀中间体中的应用

权利要求书

1.胺转氨酶AcATA突变体，其特征在于，所述胺转氨酶AcATA突变体由SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第122位进行单突变获得；

其中，第122位的甲硫氨酸突变成组氨酸、缬氨酸或苯丙氨酸。

2.一种如权利要求1所述的胺转氨酶AcATA突变体的编码基因。

3.一种包含权利要求2所述编码基因的重组载体。

4.一种包含权利要求2所述编码基因的基因工程菌。

5.如权利要求1所述的胺转氨酶AcATA突变体在生物催化西他列汀中间体前体酮1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-二丁酮合成西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1-丁酮中的应用。

6.如权利要求4所述的基因工程菌在催化西他列汀中间体前体酮1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-二丁酮合成西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1-丁酮中的应用。

7.一种生物催化西他列汀中间体前体酮1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-二丁酮合成西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1-丁酮的方法，其特征在于，包括：以1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-二丁酮为底物，权利要求1所述胺转氨酶AcATA突变体或权利要求4所述基因工程菌为生物催化剂，异丙胺为氨基供体，磷酸吡哆醛为辅酶，在缓冲溶液中进行生物催化合成反应，得到(R)-3-氨基-1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1-丁酮。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，反应体系中，反应温度为45-50℃，搅拌速度为500-600rpm，反应时间为12-36h；所述底物与氨基供体的摩尔比为1:7-12；所述底物与生物催化剂的摩尔比为1:1-3。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，以反应体系中缓冲液的总体积计，所述底物的终浓度为2-100g/L，所述氨基供体的终浓度为25-95g/L，所述辅酶的终浓度为0.3-0.5g/L，所述生物催化剂的添加量为10-50g/L。

10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，反应体系中，还包括底物的助溶剂；所述助溶剂为二甲基亚砜或甲基叔丁基醚；

在温度45-50℃、搅拌速度500-600r/min的条件下进行生物催化反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-哌啶-4-(2,4,5-三氟苯基)-1-丁酮；

反应体系中，所述基因工程菌的湿菌体的终浓度为25g/L，底物终浓度为25g/L或10g/L，二甲基亚砜或甲基叔丁基醚的体积终浓度为20％，磷酸吡哆醛0.5g/L，异丙胺80g/L。