[发明专利]一种马铃薯脱毒种薯的生产制备方法

权利要求书

1.一种马铃薯脱毒种薯的生产制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1、选取材料，收获马铃薯后将块茎用0.50-1mg/kg的赤霉素浸种20min，然后置于温室内的砂床上或种在无菌的盆土中育芽；或者，在田间植株中切取外植体，将顶芽或侧芽连同部分叶柄和茎段一起在2％-10％的次氯酸钠溶液中浸泡10-15min；

对上述培养的材料待芽长到5cm时剪取芽尖2-3cm，用镊子剥去易见的叶片，得到茎尖原材料；

步骤2、消毒，将步骤1中得到的茎尖原材料先将剥取的材料用纱布包好，并置于自来水下冲洗25-35min，然后在无菌室内用0.10％-0.20％的氯化汞溶液浸泡8-10min，再用70％的酒精消毒10-20s，最后用无菌水冲洗3-5次，并用消毒后的滤纸吸干材料表面的水分；

步骤3、茎尖剥离与接种，对茎尖0.1-0.3mm进行剥离后，插入试管或三角瓶内的培养基中；

步骤4、培养基础苗,将接种好的试管或三角瓶置于培养室内培养；

步骤5、病毒鉴定，对通过茎尖剥离培养的小苗切段繁殖数瓶后进行病毒鉴定，经指示植物鉴定不带病毒的脱毒苗即可供步骤6使用；

步骤6、扩大繁殖，经鉴定不带主要病毒的脱毒苗拿到接种室内进行检验整理，剪切后扦插到培养基上送入培养室进行培养，得到组培苗；

步骤7、移栽，选择苗龄23-27天、株高4-5cm、3叶以上健壮无污染组培苗在自然光温室中进行炼苗后，扦插至苗床内，铺上蛭石；

步骤8、原原种收获及分拣，植株生长80-120天后，85％的薯块长至2.0克以上即可收获；收获前10-15天停止浇水和营养液，待蛭石干透收获；收获时先拔出植株、抖掉薯块、捡拾蛭石表面的薯块再过筛收集其余薯块；收获的薯块风干晾晒待表皮老化后按大小筛分分级，装入透气包装袋中。

步骤9、原原种贮藏，在对贮藏室消毒完毕后，待预贮完成，按品种、规格、数量规格摆放。

2.如权利要求1所述的马铃薯脱毒种薯的生产制备方法，其特征在于：所述步骤3茎尖剥离与接种中包括以下步骤：

步骤a、接种室消毒，对接种室的地面进行清洁卫生工作，并用70％酒精喷雾降尘，同时用紫外灯照射20min；

步骤b、工具及台面消毒，将手、解剖镜、解剖针、镊子、刀片、超净工作台面用70％的酒精或新洁尔灭彻底清擦；

步骤c、解剖及接种，在解剖镜下，左手拿镊子固定材料，右手同时拿解剖针层层剥掉幼叶，直至露出带两个叶原基的生长点时，切下只带一个小叶原基的茎尖，并迅速接种到经过高压灭菌的培养基上，每瓶接种1个茎尖；解剖刀、解剖针和镊子接种工具使用一次后放入70％酒精中浸泡，然后灼烧放凉备用；

步骤d、封装，将纱布棉球在火焰上旋转灼烧2-8秒钟，接种完成后立即用纱布棉球塞紧瓶口，并用锡箔纸或牛皮纸包裹，用线绳或橡皮筋扎紧，作好标记，注明材料名称和接种日期。

3.如权利要求2所述的马铃薯脱毒种薯的生产制备方法，其特征在于：所述步骤3茎尖剥离与接种中使用的培养基为MS固体培养基；所述步骤4培养基础苗中，培养初始光照强度设置为1000lx，4周后增加至2000lx，当茎尖长到1cm高5-6周后，光照强度增加至4000lx；光照时间为16-20h；培养温度为23-27℃；

当茎尖组织泛绿后转接到每升加0.50mg2.4-D和1mgZT的半量MS培养基中进一步培养；待愈伤组织增殖和多芽原基形成后，再转接到无激素的半量MS培养基上。

4.如权利要求1所述的马铃薯脱毒种薯的生产制备方法，其特征在于：所述步骤5病毒鉴定中，对通过茎尖剥离培养的小苗切段繁殖数瓶后，每株的后代留一部分保存，另一部分进行病毒鉴定；先用血清法检测后凡呈现阳性反应者全部淘汰，对阴性反应的植株再进行指示植物鉴定，经指示植物鉴定不带病毒的脱毒苗即可供步骤6扩大繁殖使用。