[发明专利]一种乙氧氟草醚敏感型酵母菌及其制备方法

权利要求书

1.一种缺陷型酵母菌在筛选耐受PPO抑制剂类除草剂的抗性基因中的应用，其特征在于，所述应用包括如下步骤：

(1)以hem14缺陷酵母菌株为宿主菌，将目的植物的ppo基因导入该宿主菌，在不额外添加氯高铁血红素的YPAD培养基中培养，如观察到培养基中有正常的菌落产生，则表明该来自植物的ppo基因具有表达PPO的功能，将其他基因导入该宿主菌，如果观察到不额外补充氯高铁血红素的YPAD培养基中有正常菌落产生，则该基因也编码与Hem14功能相似的PPO蛋白；

(2)将目的植物的突变的ppo基因导入该宿主菌，在含有乙氧氟草醚的YPAD培养基中培养，如观察到培养基中的菌落生长明显优于野生型基因，则表明该来自植物的突变的ppo基因表达的PPO蛋白具有乙氧氟草醚耐受性，将其他基因导入该宿主菌，如果观察到在含有高浓度乙氧氟草醚的YPAD培养基中正常菌落产生，则该基因编码的蛋白也能够耐受乙氧氟草醚；

所述缺陷型酵母菌菌株的hem14基因不能正常表达, 所述缺陷型酵母菌菌株hem14基因中编码第120个氨基酸的密码子为TAG，所述hem14基因的序列为SEQ ID NO:2；

所述PPO抑制剂类除草剂为乙氧氟草醚。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述缺陷型酵母菌菌株的制备方法包括：

1)根据SEQ ID NO:2设计第一引物和第二引物，并使第一引物或第二引物中包含hem14基因的第358位碱基变异位点,并使所述第358位碱基变异位点由C变为T；

2)使用所述第一引物和第二引物扩增获得包含步骤1)所述变异位点的基因片段；

3)以步骤2)所述的基因片段构建重组载体；

4)将重组载体转化到酵母细胞中，使含有所述变异位点的基因片段通过同源重组或基因剪接的方式整合到hem14基因中。