[发明专利]快速检测高毒力肺炎克雷伯菌的检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种快速检测高毒力肺炎克雷伯菌的检测方法及试剂盒，其中，该方法包括：提取菌株DNA；将提取菌株DNA及引物置于反应液内进行LAMP扩增反应；所述反应液包含有引导物，所述引物分别为：上游外引物F3：5’‑TGGGGTTATTCTTTCGCT‑3’；下游外引物B3：5’‑TTTCCAAGCTTACTGCAATT‑3’；上游内引物FIP：5’‑CCagCAAAacAGCCTAAATACATTG‑TGGGGAGTATCTTTGAGAGG‑3’；下游内引物BIP：5’‑TTGGGATACTGTGCTATTTTTCTCT‑GGGAAGATGAGAAATACGAGC‑3’；上游环引物LF：5’‑CGCCTCCGTGATGAGGATG‑3’；下游环引物LB：5’‑GCAGAAAAGGGCTAGCGC‑3’；LAMP扩增反应结束后，对反应液进行检测，以判断是否有高毒力肺炎克雷伯菌存在。本发明实施例通过设计2对引物扩增高毒力肺炎克雷伯菌peg‑344基因的6个不同区域，建立一种快速、简便、经济地检测痰液中高毒力肺炎克雷伯菌的方法，且具有较好的特异性特征。

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，尤其涉及一种快速检测高毒力肺炎克雷伯菌的检测方法及试剂盒。

背景技术

肺炎克雷伯菌是社区获得性感染和医院获得性感染常见的致病菌。肺炎克雷伯菌具有厚厚的荚膜多糖，可有效地抑制中性粒细胞吞噬及抗生素的作用，从而更容易导致肺炎、血流感染及尿路感染等。当前随着荚膜多糖种类的差异及细菌毒力的变迁，肺炎克雷伯菌高毒力株引起的感染已经成为了一种世界性感染疾病。较医院获得性感染的“经典”肺炎克雷伯菌(classic Klebsiella pneumoniae，cKP)，hvKP感染后死亡率高，且伴有脓毒症及迁徙性感染等严重并发症。近年来，hvKP菌耐药性及其与细菌适应性/毒力的关系备受世界关注。尤其是碳青霉烯类耐药hvKP菌(CR-hvKP)的涌现，给临床治疗和基础研究带来了严重的挑战。

高毒力肺炎克雷伯菌是一种常见的社区获得性和医院感染病原体，可引起肝脓肿、眼内炎、败血症等播散性感染，多与K1和K2荚膜血清分型及高黏液表型有关，常被定义为高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)。近30多年来研究发现，肺炎克雷伯菌属已逐渐成为细菌性肝脓肿的主要病原体，尤其是以高毒力肺炎克雷伯菌更为常见，并以一种新的侵袭性综合征正在蔓延。hvKP具有很强的侵袭力及生物膜形成能力，所致感染包括腹部疾病(社区获得性肝脓肿、脾脓肿、自发性细性腹膜炎)、胸部疾病(肺炎、脓胸)、眼内炎、中枢神经系统疾病(脑膜炎)、骨骼肌与软组织感染、尿道感染、混合感染、菌血症，其中最常见的是社区获得性肝脓肿。

对高毒力肺炎克雷伯菌的检测是判断肝脓肿、眼内炎、败血症等播散性感染致病原因的重要手段。传统检测高毒力肺炎克雷伯菌的方法包括菌落形态、拉丝试验、线虫试验、中性粒细胞抗吞噬试验、血清抗性试验等,这些方法耗时较长,不能快速报告临床,容易延误病情。此外，传统方法检测灵敏度比较低而且特异性不强，尤其对于来源相近的菌株，传统方法很难通过生理生化的方式加以区分。运用传统PCR(Polymerase Chain Reaction聚合酶链式反应)方法虽然能够快速鉴定细菌,但传统PCR方法所需的设备昂贵,步骤复杂,对人员要求高,不易大面积推广。