[发明专利]认知功能障碍疾病的生物标记物及使用该生物标记物的认知功能障碍疾病的检测方法

说明书

本发明提供一种用于检测认知功能障碍疾病的生物标记物及使用该生物标记物的用于检测认知功能障碍疾病的方法。一种认知功能障碍疾病的检测方法，该检测方法同时或分别测定生物体试样中的、选自下述(a)、(b)及(c)中的1种或2种以上的用于检测认知功能障碍疾病的生物标记物。(a)由包含序列号1所表示的氨基酸序列的载脂蛋白A1的完整蛋白质或其部分肽形成的用于检测认知功能障碍疾病的生物标记物，(b)由包含序列号2所表示的氨基酸序列的甲状腺素运载蛋白的完整蛋白质或其部分肽形成的用于检测认知功能障碍疾病的生物标记物，(c)由包含序列号3所表示的氨基酸序列的补体C3的完整蛋白质或其部分肽形成的用于检测认知功能障碍疾病的生物标记物。

技术领域

本发明涉及一种生物标记物以及使用该生物标记物的认知功能障碍疾病的检测方法，所述生物标记物是能够用于检测包括轻度认知障碍以及阿尔茨海默病的认知功能障碍疾病的新型蛋白质以及肽。

背景技术

作为使用生物体呈现正常和非正常状态的试样对其差异进行判别的手段，一般来说，采用体外诊断药的技术是主要的现有技术。

体外诊断药中最多的是以血液中的成分为生物标记物进行分析来实施诊断检查。

本领域的现有技术中，测定血液中的单独的特定蛋白质或分子量1万以下的所谓低聚肽的存在量，或在酶蛋白质的情况下进行活性测定，以正常(健康人)试样和疾病试样的显著差异来帮助诊断。

即，预先对来自一定数量的健康人和疾病患者的生物体试样中的单独或多个特定蛋白质或特定低聚肽的量或它们的活性量进行计测，确定异常值和正常值的范围。接下来，通过同样的方法测定要评价的生物体试样，根据测定结果属于该确定的异常值和正常值中的哪一个范围来进行检查评价。

作为具体的计测方法，有将试样直接使用或预先稀释，使用被与基质反应而显色的酶标记的特异性一次抗体或二次抗体，以试样的显色量来计测单独或多个特定蛋白质或肽的量的酶联免疫吸附试验(ELISA；Enzyme Linked Immmunosorbent Assay)、化学发光测定法(CLIA；ChemiLuminescent Immunoassay)等。另外，还有：使用结合在一次抗体或二次抗体上的放射性同位素，计测该特定的蛋白质或肽的量的放射性免疫测定法(RIA；RadioImmunoassay)，在蛋白质为酶的情况下直接给予基质通过显色等计测产物的酶活性测定法等。

另外，还有通过高效液相色谱(HPLC)分析酶的基质分解产物的方法。另外，还有组合HPLC和质谱装置的LC-MS/MS法以及使用它的选择反应监测(selected reactionmonitoring，SRM)/多反应监测(multiple reaction monitoring，MRM)法。

另外，还有如下方法：在对试样实施适当的前处理后，进行二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)，分离蛋白质或肽后，对目标蛋白质或肽进行银染色、考马斯蓝染色、或者使用对应的抗体的免疫染色(Western印迹法)，测定试样中的浓度。

另外，有如下方法：通过柱色谱法将生物体试样分馏，通过质谱分析对该馏分中包含的蛋白质和肽进行分析。

另外，还有不采用柱色谱法，作为前处理使用蛋白质芯片进行质谱分析的方法、作为前处理使用磁珠实施质谱分析的方法。

进而，本发明人开发出immunoMS法，即，使针对作为对象的蛋白质或肽的抗体结合在珠(包括磁珠)上，由此捕捉想要测定的蛋白质或肽，然后，从珠上溶出，通过质谱分析进行测定。

另外，还报告有如下方法：为了解析完整蛋白质，用胰蛋白酶等进行分解后，通过上述方法进行至质谱分析(参见专利文献1)。

但是，均利用完整蛋白质的性质，直接进行分馏，或筛选特异性吸附的蛋白质分子，通过质谱分析来解析。