[发明专利]一种提高抗体荧光染料标记信号的方法

权利要求书

1.一种提高抗体荧光染料标记信号的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

步骤1）将抗体的巯基氨基化，所述抗体上的巯基通过卤代烷基胺进行氨基化反应；所述的卤代烷基胺选自溴乙胺、氯乙胺、碘乙胺；

步骤2）用荧光染料标记抗体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）具体包括：向抗体中加入碳酸氢钠溶液，混合均匀后再加入溴乙胺溶液反应，使得溴乙胺分子与抗体的游离巯基反应；将反应完成后溶液移至超滤离心管内，再加入PBS缓冲液、离心并除去滤液，再加入PBS缓冲液混匀离心，多次此操作，通过脱盐使抗体中未反应溴乙胺残余量至少为抗体总量的10^-3倍以上。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的荧光染料为FITC、iFluor系类染料，alexafluor系列染料。

4. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，向200 ug抗体中加入100uL 1M 碳酸氢钠溶液，混合均匀后再加入1.4 uL 50mM 溴乙胺溶液，25℃反应过夜，使得溴乙胺分子与Ab分子中的游离巯基反应；将反应完成后溶液移至超滤离心管内，再加入500uL含有0.25mM EDTA的PBS 缓冲液5 min、12000 g离心并除去滤液，再加入500uL含有0.25mM EDTA 的PBS 缓冲液混匀离心，重复此操作5次，通过脱盐使抗体中未反应溴乙胺残余量至少为抗体总量的10^-3倍以上，尽可能较多稀释。

5.如权利要求3述的方法，其特征在于，

所述步骤2）具体包括：

1、向预反应抗体溶液中加入1/10的1M碳酸氢钠缓冲液；

2、向步骤1准备好的抗体溶液加入荧光染料，轻轻晃动使染料充分溶解；将溶液避光放置于25℃环境中，反应1h；

4、超滤离心管分离纯化；

4.1、将0.5 mL 50 kd超滤离心管内管装入收集管内，将反应完成的溶液全部转移至超滤离心管内管之中，补加400 uL含0.01%NaN₃的 PBS ，14000 g 10 min离心；

4.2、将收集管内的液体倒入废液桶内，向内管之中加入500uL 含0.01%NaN₃的PBS ，14000 g 10 min离心，丢弃收集管内的废液，重复此次试验步骤5-6次，直至收集管内的废液颜色不在显示为绿色；

4.3、倒干净收集管内的废液，将超滤管内管倒置放入收集管内2000 g 2 min离心，用移液器吸出收集管内的液体转移至新的离心管内并预估液体体积，向其中补加一定量的含0.01%NaN₃的PBS ，使抗体终浓度为0.5 mg/mL；

4.4、用PBS冲洗使用完成的超滤离心管，离心甩干管内残余的液体；向收集 管内加入1mL 20%乙醇，向内管内加入500 uL 20%乙醇盖好盖子，将超滤离心管放置于4℃冰箱内进行保存；

5、将抗体放置于4℃冰箱内进行保存，并标注抗体名称，荧光染料名称，抗体浓度，抗体体积与纯化日期信息。

6.一种如权利要求1~5任一项所述的方法获得的抗体巯基氨基化衍生物。

7.如权利要求1~5任一项所述的方法在产业化生产抗体、原料药中的应用。

8.一种提高蛋白荧光染料标记信号的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

步骤1）将蛋白的巯基氨基化，所述蛋白上的巯基通过卤代烷基胺进行氨基化反应；所述的卤代烷基胺选自溴乙胺、氯乙胺、碘乙胺；

步骤2）用荧光染料标记蛋白。

9.一种如权利要求8所述的方法获得的蛋白巯基氨基化衍生物。

10.如权利要求8所述的方法在产业化生产蛋白及原料药中的应用。