[发明专利]明胶海绵及其制备方法及储存方法

权利要求书

1.一种支持肿瘤组织/或细胞三维生长的明胶海绵的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

由牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白与氰酸和甲醇的混合物混合，经孔泵送同质化，制备明胶混合物；以及

将海绵与该明胶混合物黏附形成明胶海绵。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述明胶混合物制备包括：

步骤S1：胶原蛋白原材料前处理，所述胶原蛋白原材料为牛深层屈肌腱；

步骤S2：胶原蛋白原材料酶解，获得牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白；

步骤S3：胶原蛋白盐析纯化，提纯牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白；

步骤S4：同质化牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白；

步骤S5：制备明胶混合物；以及

步骤S6，储存所述明胶混合物。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中胶原蛋白原材料前处理包括：

剔除牛深层屈肌腱中的筋膜、脂肪、肌肉表面非胶原蛋白和其他无关物质，自来水清洗后，冷冻，于切片机上沿着垂直于牛深层屈肌腱的纵轴切成厚度为0.4-1㎜的片块。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述片块的厚度为0.6㎜。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2：胶原蛋白原材料酶解包括：

按照0.5-2mg/g配比将无花果蛋白酶溶解于pH为7.0-8.0、浓度为0.02-0.5mol/L磷酸盐缓冲液中形成酶解液1；将经步骤S1处理的牛深层屈肌腱的片块置入酶解液1中，于35-38°C下搅拌，搅拌时间1-3小时；经蒸馏水清洗0.5-2小时，制得牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白；其中，每g牛深层屈肌腱的的片块添加0.5-2mg的无花果蛋白酶。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于： 按照0.8mg/g将无花果蛋白酶溶解于pH为7.0的0.5mol/L磷酸盐缓冲液中形成酶解液2；将经步骤S1制得牛深层屈肌腱的片块置入酶解液2中；于37℃下搅拌2小时；经蒸馏水清洗1小时，制得牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白；其中，每g牛深层屈肌腱的的片块添加0.8mg的无花果蛋白酶。

7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S3：胶原蛋白盐析纯化包括：

将牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白于1-5%中性盐溶液中连续提取两次，每次1-2小时，提纯牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，将牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白于3%中性盐溶液中连续提纯2次，每次2小时，提纯牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白。

9.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S4：同质化胶原蛋白包括：

添加质量分数2-5%氰酸至等体积混合的甲醇和水的混合液中制得所述混合溶液1；将步骤S3中提纯的牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白加入所述混合溶液1中；在40℃下，搅拌0.5-2小时，经孔泵送同质化。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，添加质量分数2.5%氰酸至等体积混合的甲醇和水的混合液中制得所述混合溶液2；将步骤S3中提纯的牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白加入所述混合溶液2中；在40℃下，搅拌1.5小时，经孔泵送同质化。

11.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括：所述海绵与所述明胶混合物黏附之前，所述海绵经丙酮、乙醇溶液中清洗处理，经无菌蒸馏水中洗涤处理。

12.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，切割海绵成厚度为1㎜、宽度为5㎜、长度为8㎜的海绵薄片；蒸馏水中煮海绵薄片，重复三次，每次0.5小时；取出海绵薄片依次经丙酮中清洗处理0.5-1.5小时，乙醇中清洗处理0.5-1.5小时；再取出海绵薄片于沸腾的三蒸水的洗涤0.25-0.5小时，重复三次。