[发明专利]一种用于面部提升的皮肤成纤维细胞制剂的制备方法

说明书

本发明涉及皮肤成纤维细胞制剂的制备方法领域，具体的来说涉及一种用于面部提升的皮肤成纤维细胞制剂的制备方法，主要包括，自体脂肪干细胞的获取及培养步骤及皮肤成纤维细胞制备步骤，本发明能够有效缓解皮肤松弛，有效改善面部皱纹的情况，解决了面部老化所带来的面部皮肤问题，其效果要高于常用注射肉毒素的方法，此外本发明的主要制备过程简单，同时对制备操作环境要求低从而降低了皮肤成纤维细胞制剂的成本。

技术领域

本发明涉及皮肤成纤维细胞制剂的制备方法领域，具体的来说涉及一种用于面部提升的皮肤成纤维细胞制剂的制备方法。

背景技术

人表皮成纤维细胞分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动。皮肤成纤维细胞是组成皮肤真皮的主要结构成分，其可合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、网状纤维、透明质酸等细胞外基质，对于保持皮肤强度和弹性、修复损伤及美容美体具有重要作用，是维持皮肤年轻态的决定性因素，也是维持皮肤结构稳定的重要组成部分，因此，基于皮肤成纤维细胞形成的皮肤胶原蛋白修复体系一旦形成，它的生命旺盛周期为10-15年。人随着年龄的增长，皮肤成纤维细胞数量越来越少，活性越来越低，相应的其产生的胶原蛋白、弹性纤维、透明质酸这些物质就会减少，不足以支撑皮肤结构，从而导致真皮层变薄，皮肤开始松弛，失去弹性，出现皱纹。在电镜下，皮肤成纤维细胞表面有一些微绒毛和粗短的突起，胞质内富含粗面内质网、游离核糖体和发达的高尔基复合体，皮肤成纤维细胞的超微结构表明，细胞合成蛋白质功能旺盛，皮肤成纤维细胞既合成和分泌胶原蛋白，弹性蛋白，生成胶原纤维、网状纤维和弹性纤维，也合成和分泌糖胺多糖和糖蛋白等基质成分。在婴儿和青年人皮肤中，I犁胶原蛋白的含量约占70％，III型胶原蛋白占30％。而由此形成的皮肤胶原蛋白修复体系一旦形成，它的生命旺盛周期为10-15年。 人随着年龄的增长，成纤维细胞数量越来越少，活性越来越低，相应的其产生的胶原蛋白、弹性纤维、透明质酸这些物质就会减少，不足以支撑皮肤结构，导致真皮层变薄，皮肤开始松弛，失去弹性，出现皱纹。在衰老过程中，成纤维细胞合成Ⅲ型胶原蛋白增加，I型胶原蛋白减少。成纤维细胞受损，同时还产生大量异常弹性蛋白，导致皮肤弹性下降，皱纹增多，且难以平复，因而，补充成纤维细胞能够从根源上解决面部皮肤衰老及损伤问题，让皮肤从初代细胞开始重生。

发明内容

一般来说，人随着年龄的增长，成纤维细胞数量越来越少，活性越来越低，相应的其产生的胶原蛋白、弹性纤维、透明质酸这些物质就会减少，不足以支撑皮肤结构，导致真皮层变薄，皮肤开始松弛，失去弹性，出现皱纹，产生衰老，针对上述问题，本发明提供一种用于面部提升的皮肤成纤维细胞制剂的制备方法，其技术方案如下，一种用于面部提升的皮肤成纤维细胞制剂的制备方法，主要包括，自体脂肪干细胞的获取及培养步骤及皮肤成纤维细胞制备步骤，所述的自体脂肪干细胞的获取及培养步骤如下：将取得的皮下脂肪组织放入离心管后移至离心机进行离心作业，而后使用PBS缓冲液冲洗浸泡，再置于离心机中进行离心作业，步骤重复三次，将离心管由离心机中取出，剔除试管内肉眼可见的血管以及结缔组织后使用剪刀将离心管内剩余物质剪碎成小块，置于离心管中，加入两倍体积的胶原酶，一倍体积的双抗，封口后置于摇床中消化后加入等体积的低糖DMEM终止消化并移至离心机中进行离心，离心后在离心管内分为三层，取最下层液体加入完全培养基重悬，使用细胞筛网过滤，过滤后细胞浓度调整为6x10⁵单核细胞/mL，接种于T25，培养条件为37℃，5%CO₂，饱和湿度，当T25中的细胞生长至90%融合时，胰蛋白酶将细胞以1∶2或1∶3传代继续培养后得到自体脂肪干细胞；

所述的皮肤成纤维细胞制备步骤如下：