[发明专利]一株小白链霉菌基因工程菌及其在ε-聚赖氨酸生产中的应用

权利要求书

1.一株小白链霉菌基因工程菌Q-PL2，已于2019年10月30日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏登记号为CGMCC NO.18772，其中，所述小白链霉菌基因工程菌Q-PL2包含基因工程引入的一个或多个ε-聚赖氨酸合成酶基因及其表达元件。

2.如权利要求1所述的小白链霉菌基因工程菌Q-PL2，其中，所述表达元件具体为启动子和核糖体结合位点。

3.如权利要求1所述的小白链霉菌基因工程菌Q-PL2，其中，所述ε-聚赖氨酸合成酶基因的核苷酸序列包含SEQ ID NO.2序列或其同源序列。

4.如权利要求1所述的小白链霉菌基因工程菌Q-PL2，其中，所述小白链霉菌基因工程菌Q-PL2，发酵生产ε-聚赖氨酸的能力是小白链霉菌野生菌株的2～25倍。

5.一种使用权利要求1所述的小白链霉菌基因工程菌Q-PL2生产ε-聚赖氨酸的方法。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述方法使用包含柠檬酸盐的培养基发酵小白链霉菌基因工程菌Q-PL2生产ε-聚赖氨酸。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述培养基是发酵培养基。

8.如权利要求6所述的方法，其中，所述发酵培养基包含柠檬酸盐1～20克/升。

9.如权利要求6所述的方法，其中，所述方法包括：

平板培养：将小白链霉菌Q-PL2接种到含60～120微克/毫升安普霉素的MS固体培养基上，25～35℃培养4～7天，待培养基表面长满黑色孢子待用；

种子培养：从平板上收集孢子，接种到含60～120微克/毫升安普霉素的种子培养基中，25～35℃培养36～72小时；

发酵培养：将培养好的种子培养液接种至装有发酵培养基的发酵罐进行培养，培养温度25～35℃，控制溶氧10％～100％，通气比1～5vvm，待发酵液的pH值降低至3.8～4.2时，用碱维持发酵液的pH值不变，培养过程中监控发酵液中碳源的浓度，待碳源浓度为5～15克/升时流加补料培养基，通过监测发酵液中碳源浓度反馈调节流加速度，间隔测定发酵液中ε-聚赖氨酸产量，发酵培养的总时间为36～144小时。

10.如权利要求9所述的方法，其中，所述发酵培养基的配方包含碳源40～100克/升，氮源2～20克/升，柠檬酸盐1～20克/升，磷酸氢二钾0.2～2克/升，磷酸二氢钾0.5～5克/升，七水硫酸锌0.01～0.1克/升，七水硫酸镁0.1～2克/升，七水硫酸亚铁0.01～0.1克/升，pH5.5～7.0；所述补料培养基的成分包含碳源0～600克/升，氮源20～200克/升，柠檬酸盐10～100克/升。

11.如权利要求10所述的方法，其中，所述补料培养基中的碳源、氮源和柠檬酸盐与所述发酵培养基中的碳源、氮源和柠檬酸盐相同。

12.如权利要求10或11所述的方法，其中，所述碳源为葡萄糖、甘油、木糖、果糖、甘露醇的一种或者多种组合。

13.如权利要求10或11所述的方法，其中，所述氮源为硫酸铵、氯化铵、尿素、硝酸铵、酵母粉、大豆胨、玉米浆、花生饼粉、蛋白胨的一种或多种组合。

14.如权利要求10或11所述的方法，其中，所述柠檬酸盐为柠檬酸钠、柠檬酸铵、柠檬酸钾、柠檬酸锌、柠檬酸钙、柠檬酸镁、柠檬酸二氢钠、柠檬酸二氢钾、柠檬酸钾钠、柠檬酸铁、柠檬酸氢二铵的一种或多种组合。