[发明专利]一种诱导朝鲜淫羊藿嫩茎组织突变的新品种培育方法

权利要求书

1.一种诱导朝鲜淫羊藿嫩茎组织突变的新品种培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)材料选择与预处理：取5月上旬野生朝鲜淫羊藿新萌发的嫩茎，切割成0.5cm茎段后用75%乙醇涮洗7-10s后移至饱和次氯酸钠溶液浸泡2-5min，无菌水冲洗10次，并用无菌滤纸吸干表面水分，接着用无菌手术刀和镊子切割成0.1cm的嫩茎切片，分批放入不同浓度的EMS溶液中，浸泡20-100min，EMS以浓度为0.1mol·L^-1、pH＝7的磷酸盐缓冲液作为溶剂配制成体积百分比浓度为0.2-1.6%的EMS溶液，然后用无菌水冲洗嫩茎切片组织12次以备接种；

(2)嫩茎切片胚性愈伤组织的诱导培养：将步骤(1)中经过EMS浸泡后的嫩茎切片组织转接到胚性愈伤组织诱导培养基中，并置于光照周期3h·d^-1、光照强度500lx和温度28±2℃条件下培养75天，嫩茎切片组织完全脱分化转变成红褐色的胚性愈伤组织，并进行胚性愈伤组织继代增殖培养；所述胚性愈伤组织诱导培养基为基本培养基附加180g·L^-1油菜花提取液和1.1mg·L^-1 IAA，以及6.8g·L^-1琼脂粉，38g·L^-1蔗糖；

(3)胚性愈伤组织再分化培养：将步骤(2)中胚性愈伤组织切割成适宜大小的组织块，并转接到胚性愈伤组织再分化培养基中，并置于光照周期13h·d^-1、光照强度1000lx和温度24±2℃条件下继续培养60天，胚性愈伤组织分化出具有独立性、两极性、可分离的胚状体；所述胚性愈伤组织再分化培养基为基本培养基附加220g·L^-1油菜花提取液、0.50mg·L^-1 IAA和1.30mg·L^-1赤霉素，以及7.0g·L^-1琼脂粉，40g·L^-1蔗糖；

(4)胚状体复壮生长培养：将步骤(3)中胚状体剥离后转接到胚状体复壮生长培养基中，并置于光照周期14h·d^-1、光照强度1200lx和温度26±2℃条件下进行复壮生长培养，培养至10天胚状体呈两极化生长，培养至40天胚状体完全发育生长为含有根和茎叶的小植株；所述胚状体复壮生长培养基为基本培养基附加55g·L^-1 油菜花提取液、0.05mg·L^-1 IAA和0.75mg·L^-1赤霉素，以及6.8g·L^-1琼脂条，15g·L^-1蔗糖，并调节pH值为6.0；

(5)移栽和定植及品系确定：将步骤(4)中小植株驯化炼苗后植于营养钵中，待长至5-8cm时，定植栽培到田间，观察其生长情况，并进行分类及注标签；接着将差异突变体进行组培快繁，再进行不同适宜地域栽培；最后进行筛选确定遗传稳定的优良性状突变体作为品系，并进行编号；

所述基本培养基由下列物质组成：马铃薯上清液33g·L^-1；大量元素：206.25mg·L^-1 NH₄NO₃，237.5mg·L^-1 KNO₃，55mg·L^-1 CaCl₂·2H₂O，46.25mg·L^-1 MgSO₄·7H₂O，21.25mg·L^-1 KH₂PO₄；铁盐：29.2mg·L^-1 FeSO₄·7H₂O，12.5mg·L^-1 Na₂·EDTA·2H₂O。

2.根据权利要求1所述的诱导朝鲜淫羊藿嫩茎组织突变的新品种培育方法，其特征在于：所述不同浓度的EMS溶液分别为体积百分比0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.2%、1.4%、1.6%的EMS溶液。

3.根据权利要求1所述的诱导朝鲜淫羊藿嫩茎组织突变的新品种培育方法，其特征在于：所述胚性愈伤组织诱导培养基的pH值为6.0。