[发明专利]一种诱导朝鲜淫羊藿嫩茎组织突变的新品种培育方法

说明书

本发明属于植物的繁殖技术领域，具体涉及一种诱导朝鲜淫羊藿嫩茎组织突变的新品种培育方法。本申请的诱导朝鲜淫羊藿嫩茎组织突变的新品种培育方法，通过以朝鲜淫羊藿嫩茎材料，利用甲基磺酸乙酯(EMS)与植物组织培养技术相结合，采用胚性愈伤组织诱导、再分化、胚状体复壮等方法，获得各单株独立性强、单株遗传信息纯度高、单株来源清晰的朝鲜淫羊藿人工栽培新品种，对朝鲜淫羊藿种群的扩增具有重要的保护和生态意义，并且该方法可进一步应用于朝鲜淫羊藿突变体库的构建以及直接作为品系进行栽培和品种审定。

技术领域

本发明属于植物的繁殖技术领域，具体涉及一种诱导朝鲜淫羊藿嫩茎组织突变的新品种培育方法。

背景技术

朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)是小檗科淫羊藿属多年生宿根草本植物，集中分布在中国东北长白山地区。多生林下或灌丛中，海拔400-1500米，喜生于土壤疏松、土质肥沃、腐殖质含量较高的地方。朝鲜淫羊藿是中国传统的补益类中药材，《中华人民共和国药典》有收载，称其具有温补肾阳，强筋骨，祛风湿等功效，属长白山道地性中药材，可用于治疗阳萎遗精、早泄、小便失禁、关节冷痛、月经不调等症。淫羊藿药用成分为：淫羊藿苷、淫羊藿素、大黄素、甘草素、金丝桃苷、槲皮素、三十一烷、甾醇、棕榈酸、银杏醇、木兰花碱、花色素、咖啡酸等；其功能为：扩张冠状动脉血管、降血压镇咳、祛痰、平喘、抗菌、抗病毒及抗炎，治疗阳痿早泄、风湿性关节炎及妇科病。现代医学研究则指出，朝鲜淫羊藿除具有传统医学价值及使用范围以外，还有许多新的药理作用和用途，比如抗衰老、促进骨骼生长、改善造血系统障碍等等，因此，它的制品是现代医学及食品领域里最热门的产品之一，是极具开发价值的一种植物类药材，已进入“十大吉药”名录。

由于连年的大量采收，造成朝鲜淫羊藿野生资源锐减，收购量降低，品质下降。目前，朝鲜淫羊藿的人工驯化栽培和规范化种植尚未取得成功经验，药材商品完全来源于野生资源。在提倡保护性采收的同时，应当加强对朝鲜淫羊藿的育种、人工驯化和栽培生产的研究，暂未实现大面积人工栽培，仍在小范围摸索阶段。

在现有技术中，大多研究集中于朝鲜淫羊藿的人工驯化和栽培生产技术研究，未发现进行品种改良和选育新品种(系)的相关报道。通过人工驯化栽培研究发现其人工栽培不仅存在淫羊藿苷等主要成分不足且退化严重的现象，而且栽培过程中还存在烂根和病虫害严重等问题。因此，在研究朝鲜淫羊藿防病虫害的同时，急需开发抗性强的新品种，并应用于人工规模化栽培生产。

发明内容

为了解决上述随着朝鲜淫羊藿需求量的增大，采集和消耗量已超过自然资源的再生能力，导致物种濒危以及朝鲜淫羊藿人工培养存在淫羊藿苷等主要成分不足且退化严重的现象和栽培过程中存在烂根和病虫害严重等问题。本发明提供一种诱导朝鲜淫羊藿嫩茎组织突变的新品种培育方法。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种诱导朝鲜淫羊藿嫩茎组织突变的新品种培育方法，包括以下步骤：

(1)材料选择与预处理：取5月上旬野生朝鲜淫羊藿新萌发的嫩茎，切割成0.5cm茎段后用75％乙醇涮洗7-10s后移至饱和次氯酸钠溶液浸泡2-5min，无菌水冲洗10次，并用无菌滤纸吸干表面水分，接着用无菌手术刀和镊子切割成0.1cm的嫩茎切片，分批放入不同浓度的EMS溶液中，浸泡20-100min，然后用无菌水冲洗嫩茎切片组织12次以备接种；

(2)嫩茎切片胚性愈伤组织的诱导培养：将步骤(1)中经过EMS浸泡后的嫩茎切片组织转接到胚性愈伤组织诱导培养基中，并置于光照周期3h·d^-1、光照强度500lx和温度28±2℃条件下培养75天，嫩茎切片组织完全脱分化转变成红褐色的胚性愈伤组织，并进行胚性愈伤组织继代增殖培养；

(3)胚性愈伤组织再分化培养：将步骤(2)中胚性愈伤组织切割成适宜大小的组织块，并转接到胚性愈伤组织再分化培养基中，并置于光照周期13h·d^-1、光照强度1000lx和温度24±2℃条件下继续培养60天，胚性愈伤组织分化出具有独立性、两极性、可分离的胚状体；