[发明专利]一种EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法

权利要求书

1.一种EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)材料选择与预处理：取5月下旬野生麻叶千里光新萌发腋芽发出的嫩叶，在超净工作台内，用75％乙醇涮洗7-10s后移至2-5％次氯酸钠溶液浸泡4-6min，无菌水冲洗8次，并用无菌滤纸吸干表面水分，接着用无菌手术刀和镊子切割成0.3×0.5cm的长方形叶片组织，分批放入不同浓度的EMS溶液中，浸泡20-120min；最后用无菌水冲洗叶片组织8次以备接种；

(2)叶片组织胚性愈伤组织的诱导培养：将步骤(1)中经过EMS浸泡后的叶片组织转接到胚性愈伤组织诱导培养基中，并置于光照周期5h·d^-1、光照强度750lx和温度24±2℃条件下培养60天，叶片组织完全脱分化转变成黄白色的胚性愈伤组织，并进行胚性愈伤组织继代增殖培养；

(3)胚性愈伤组织再分化培养：将步骤(2)中胚性愈伤组织切割成0.3cm³的组织块，并转接到胚性愈伤组织再分化培养基中，并置于光照周期10h·d^-1、光照强度1100lx和温度25±2℃条件下继续培养55天，胚性愈伤组织分化出具有独立性、两极性、可分离的胚状体；

(4)胚状体复壮生长培养：将步骤(3)中胚状体剥离后转接到胚状体复壮成长培养基中，并置于光照周期12h·d^-1、光照强度1300lx和温度25±2℃条件下进行复壮成长培养，培养至15天胚状体呈两极化生长，培养至45天胚状体完全发育生长为含有根和茎叶的小植株；

(5)移栽和定植及品系确定：将步骤(4)中小植株驯化炼苗后植于营养钵中，待长至20-30cm时，定植栽培到田间，观察其生长情况，并进行分类及注标签；接着将差异突变体进行组培快繁，再进行不同适宜地域栽培；最后进行筛选确定遗传稳定的优良性状突变体作为品系，并进行编号。

2.根据权利要求1所述的EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法，其特征在于：所述步骤(1)中EMS以浓度为0.1mol·L^-1、pH＝7的磷酸盐缓冲液作为溶剂配制成体积百分比浓度为0.02-0.14％的EMS溶液。

3.根据权利要求2所述的EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法，其特征在于：所述不同浓度的EMS溶液分别为体积百分比0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.10％、0.12％、0.14％的EMS溶液。

4.根据权利要求1所述的EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法，其特征在于：所述培养基包括基本培养基，所述基本培养基的成份包括下列物质：马铃薯上清液35g·L^-1；大量元素：53.6mg·L^-1(NH₄)₂SO₄，60mg·L^-1CaCl₂·2H₂O，60mg·L^-1NaH₂PO₄·H₂O；铁盐：13.9mg·L^-1FeSO₄·7H₂O，18.65mg·L^-1Na₂·EDTA·2H₂O。

5.根据权利要求1或4所述的EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法，其特征在于：所述步骤(2)中培养基为基本培养基附加2.6mg·L^-1KT和0.8mg·L^-1NAA，以及7.2g·L^-1琼脂粉，30g·L^-1蔗糖。

6.根据权利要求5所述的EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法，其特征在于：所述步骤(2)中培养基的pH值为5.8。