[发明专利]一种EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法

说明书

本发明属于植物的繁殖技术领域，具体涉及一种EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法。本申请的EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法，通过以麻叶千里光嫩叶组织为材料，利用甲基磺酸乙酯(EMS)与植物组织培养技术相结合，采用胚性愈伤组织诱导、再分化、胚状体复壮等方法，获得各单株独立性强、单株遗传信息纯度高、单株来源清晰等特征的新型的麻叶千里光人工栽培品种，对麻叶千里光种群的扩增具有重要的保护和生态意义，并且该方法可进一步应用于麻叶千里光突变体库的构建以及直接作为品系进行栽培和品种审定。

技术领域

本发明属于植物新品种技术领域，具体涉及一种EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法。

背景技术

麻叶千里光(Senecio cannabifolius Less.)是菊科千里光属植物，别名返魂草，多年生根状茎草本。主要分布于中国、俄罗斯(西伯利亚东部和远东地区)、朝鲜、日本和阿留申群岛，在中国分布于黑龙江、吉林和内蒙古(大兴安岭)。生长于草地、林下或林缘，喜阳植物，适于肥沃潮湿的土壤，害怕干旱和积水，pH在5-6.5之间。全草入药，味苦、平，清热解毒、散血消肿、下气通经，并可用于瘀血胀痛、跌打损伤；民间常用于治疗感染性疾病；临床主要用于清热祛痰，止咳平喘，并适用于急慢性呼吸道感染，喘息性支气管炎、肺炎等症状。药材中所含有的金丝桃苷和绿原酸，是肺宁颗粒及其它中成药的主要活性成分，是百余种中成药的配伍药材，已被《中华人民共和国药典》收载。

目前，麻叶千里光已进入人工栽培阶段，但现有的人工栽培种退化快，一批种苗仅能栽培7-8年，采收的药材质量逐年降低，而且不同地域栽培出现金丝桃苷和绿原酸含量不一致，并且发生病虫害逐年上升等问题。因此，为了解决上述问题，急需培养出麻叶千里光的有效成分含量多而稳定、抗性强的新品种，以此替换现有栽培种。但是现有技术中，麻叶千里光的研究多集中在栽培技术和检测等领域，未发现有进行品种改良和选育新品种(系)的相关报道。

发明内容

为了解决上述麻叶千里光人工栽培种退化快，采收的药材质量差，而且不同地域栽培的麻叶千里光出现金丝桃苷和绿原酸含量不一致，并且发生病虫害严重等问题。本发明提供一种EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种EMS诱导麻叶千里光嫩叶组织突变的新品种培育方法，包括以下步骤：

(1)材料选择与预处理：取5月下旬野生麻叶千里光新萌发腋芽发出的嫩叶，在超净工作台内，用75％乙醇涮洗7-10s后移至2-5％次氯酸钠溶液浸泡4-6min，无菌水冲洗8次，并用无菌滤纸吸干表面水分，接着用无菌手术刀和镊子切割成0.3×0.5cm的长方形叶片组织，分批放入不同浓度的EMS溶液中，浸泡20-120min；最后用无菌水冲洗叶片组织8次以备接种；

(2)叶片组织胚性愈伤组织的诱导培养：将步骤(1)中经过EMS浸泡后的叶片组织转接到胚性愈伤组织诱导培养基中，并置于光照周期5h·d^-1、光照强度750lx和温度24±2℃条件下培养60天，叶片组织完全脱分化转变成黄白色的胚性愈伤组织，并进行胚性愈伤组织继代增殖培养；

(3)胚性愈伤组织再分化培养：将步骤(2)中胚性愈伤组织切割成0.3cm³的组织块，并转接到胚性愈伤组织再分化培养基中，并置于光照周期10h·d^-1、光照强度1100lx和温度25±2℃条件下继续培养55天，胚性愈伤组织分化出具有独立性、两极性、可分离的胚状体；

(4)胚状体复壮生长培养：将步骤(3)中胚状体剥离后转接到胚状体复壮成长培养基中，并置于光照周期12h·d^-1、光照强度1300lx和温度25±2℃条件下进行复壮成长培养，培养至15天胚状体呈两极化生长，培养至45天胚状体完全发育生长为含有根和茎叶的小植株；