[发明专利]一种EMS诱导软枣猕猴桃种胚下胚轴突变的新品种培育方法

说明书

本发明属于植物的繁殖技术领域，具体涉及一种EMS诱导软枣猕猴桃种胚下胚轴突变的新品种培育方法。本申请的EMS诱导软枣猕猴桃种胚下胚轴突变的新品种培育方法，通过以软枣猕猴桃种胚下胚轴为材料，利用甲基磺酸乙酯(EMS)与植物组织培养技术相结合，采用胚性愈伤组织诱导、再分化、胚状体复壮等方法，获得各单株独立性强、单株遗传信息纯度高、单株来源清晰等特征的新型的软枣猕猴桃人工栽培品种，对软枣猕猴桃种群的扩增具有重要的保护和生态意义，并且该方法可进一步应用于软枣猕猴桃突变体库的构建以及直接作为品系进行栽培和品种审定。

技术领域

本发明属于植物新品种技术领域，具体涉及一种EMS诱导软枣猕猴桃种胚下胚轴突变的新品种培育方法。

背景技术

软枣猕猴桃(Actinidia arguta(Sieb.et Zucc.)Planch.ex Miq.)，别名中华软枣猕猴桃、软枣子、藤瓜、狗枣子、金果木、猕猴梨、猕猴桃、软枣、深山木天蓼、藤梨、小洋桃等，是猕猴桃科猕猴桃属藤本落叶植物。果实可食用，营养价值很高，含大量维生素C、淀粉，果胶质等，可加工成果酱、果汁、果脯、罐头、酿酒或用于制作糕点、糖果等多种食品。亦可药用，有强壮、解热、健胃、止血等功能；根及根皮对消化道癌有一定治疗和抑制作用；种子含油量35.62％，是一种较好干性油，具有极高的经济和药用等价值；还是良好的蜜源和观赏植物，目前，软枣猕猴桃还是以野生为主，人工栽培(品种)为辅。

在现有技术中，软枣猕猴桃多采用杂交方式进行育种，杂交后种子繁殖后代性状产生分离，再在种子苗中选育优良性状植株进行栽培。通过观察种子苗遗传稳定性，发现软枣猕猴桃不仅存在遗传多样性，而且其杂交后选育的优良品系又存在不同温度、地理、气候等区域性果形、品质的栽培多态性，导致同一品种不同地区栽培出现果形、品质等差异，造成品种的不确定性，引起种植户与品种权人的纠纷。

发明内容

为了解决上述软枣猕猴桃采用杂交方式育种，易出现遗传多样性和栽培多态性，导致同一品种不同地区栽培出现果形、品质等差异，造成品种的不确定性，引起种植户与品种权人的纠纷等问题，本发明提供一种EMS诱导软枣猕猴桃种胚下胚轴突变的新品种培育方法。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种EMS诱导软枣猕猴桃种胚下胚轴突变的新品种培育方法，包括以下步骤：

(1)材料选择与预处理：取9月下旬野生软枣猕猴桃成熟果实，以清水将果实中的种子洗净，并获取留水底的成熟种子；再将成熟种子与河沙1:3拌匀，种子和河沙混合物保持相对湿度为75％，并置于温度为18-20℃、相对湿度为78％的人工气候箱内黑暗处理30天；

种胚进一步发育成熟后将种子从河沙中分离洗净，在无菌超净工作台内，将种子用75％乙醇涮洗30s后移至2-5％次氯酸钠溶液浸泡10min，无菌水冲洗10次，并用无菌滤纸吸干表面水分；接着用无菌手术刀和镊子剥去种皮，掰开两子叶取出种胚，再分离出下胚轴，将下胚轴分批放入不同浓度的EMS溶液中，浸泡2-6h；最后用无菌水冲下胚轴10次以备接种；

(2)下胚轴胚性愈伤组织的诱导培养：将步骤(1)中经过EMS浸泡后的下胚轴转接到胚性愈伤组织诱导培养基中，并置于光照周期7h·d^-1、光照强度800lx和温度26±2℃条件下培养55天，下胚轴完全脱分化转变成黄绿色的胚性愈伤组织，并进行胚性愈伤组织继代增殖培养；

(3)下胚轴胚性愈伤组织再分化培养：将步骤(2)中胚性愈伤组织切割成小块，并转接到胚性愈伤组织再分化培养基中，并置于光照周期12h·d^-1、光照强度1200lx和温度26±2℃条件下继续培养45天，胚性愈伤组织分化出具有独立性、两极性、可分离的胚状体；

(4)胚状体复壮生长培养：将步骤(3)中胚状体剥离后转接到胚状体复壮成长培养基中，并置于光照周期10h·d^-1、光照强度1000lx和温度26±2℃条件下进行复壮成长培养，胚状体呈两极化生长，培养至30天胚状体完全发育生长为含有根和茎叶的小植株；