[发明专利]一种诱导山荆子花药突变的新品种培育方法

权利要求书

1.一种诱导山荆子花药突变的新品种培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)材料选择与预处理：6月上旬，待野生山荆子显蕾后选取饱满花蕾，将花蕾用75％乙醇涮洗10s后移至饱和次氯酸钠溶液浸泡2min，无菌水冲洗10次，并用无菌滤纸吸干表面水分；接着将花蕾剥开，摘下雄蕊上的花药，将花药分批放入不同浓度的EMS溶液中，浸泡40-120min；最后用无菌水冲花药10次以备接种；

(2)花药胚性愈伤组织的诱导培养：将步骤(1)中经过EMS浸泡后的花药转接到胚性愈伤组织诱导培养基中，并置于光照周期6h·d^-1、光照强度800lx和温度26±2℃条件下培养80天，花药完全脱分化转变成白黄色的胚性愈伤组织；

(3)胚性愈伤组织再分化培养：将步骤(2)中胚性愈伤组织切割成小块，并转接到胚性愈伤组织再分化培养基中继续培养，同时置于光照周期10h·d^-1、光照强度1000lx和温度25±2℃条件下培养60天，胚性愈伤组织分化出具有独立性、两极性、可分离的胚状体；

(4)胚状体发育培养：将步骤(3)中含有胚状体的胚性愈伤组织继续培养25天，胚状体逐渐与胚性愈伤组织脱离；接着将胚状体剥离后转接到胚状体发育培养基中，并置于光照周期12h·d^-1、光照强度1200lx和温度24±2℃条件下进行发育培养，培养至45天胚状体两极化发育成含有根和茎叶的小植株；

(5)移栽和定植及品系确定：当步骤(4)中小植株在培养瓶中长至2.0cm时，从瓶中取出经驯化炼苗后栽植于营养钵中，待长至20cm时，定植栽培到田间，观察其生长情况；接着将差异单株注标签并嫁接在不同适宜地域栽培；最后进行筛选确定遗传稳定的优良性状突变体作为品系，并进行编号。

2.根据权利要求1所述的诱导山荆子花药突变的新品种培育方法，其特征在于：所述步骤(1)中EMS以浓度为0.1mol·L^-1、pH＝7的磷酸盐缓冲液作为溶剂配制成体积百分比浓度为0.08-0.24％的EMS溶液。

3.根据权利要求2所述的诱导山荆子花药突变的新品种培育方法，其特征在于：所述不同浓度的EMS溶液分别为体积百分比0.08％、0.10％、0.12％、0.14％、0.16％、0.18％、0.20％、0.22％、0.24％的EMS溶液。

4.根据权利要求1所述的诱导山荆子花药突变的新品种培育方法，其特征在于：所述培养基包括基本培养基，所述基本培养基的成份包括下列物质：马铃薯上清液60g·L^-1；大量元素：20.0mg·L^-1NH₄NO₃，7.5mg·L^-1CaCl₂·2H₂O，8.9mg·L^-1MgSO₄·7H₂O；铁盐：1.5mg·L^-1FeSO₄·7H₂O，1.8mg·L^-1Na₂·EDTA·2H₂O。

5.根据权利要求1或4所述的诱导山荆子花药突变的新品种培育方法，其特征在于：所述步骤(2)中培养基为基本培养基附加2.45mg·L^-1异戊烯腺嘌呤和0.35mg·L^-1NAA，以及6.8g·L^-1琼脂粉，50g·L^-1蔗糖。

6.根据权利要求5所述的诱导山荆子花药突变的新品种培育方法，其特征在于：所述步骤(2)中培养基的pH值为6.0。

7.根据权利要求1或4所述的诱导山荆子花药突变的新品种培育方法，其特征在于：所述步骤(3)中培养基为基本培养基附加3.2mg·L^-1异戊烯腺嘌呤，以及7.0g·L^-1琼脂粉，40g·L^-1蔗糖。