[发明专利]一种诱导山荆子花药突变的新品种培育方法

说明书

本发明属于植物的繁殖技术领域，具体涉及一种诱导山荆子花药突变的新品种培育方法。本申请的诱导山荆子花药突变的新品种培育方法，通过以山荆子花药为材料，通过适宜浓度的甲基磺酸乙酯浸泡一定时间，再结合植物组织培养技术，通过采用胚性愈伤组织诱导、再分化、胚状体发育等方法，获得各单株独立性强、单株遗传信息纯度高、单株来源清晰等特征的新型的山荆子人工栽培品种，该品种遗传稳定，可作为品系栽培和构建山荆子突变体库。

技术领域

本发明属于植物新品种技术领域，具体涉及一种诱导山荆子花药突变的新品种培育方法。

背景技术

山荆子(学名：Malus baccata(L.)Borkh.)：为蔷薇科苹果属落叶乔木，别名：林荆子、山定子、山丁子，树高可达4-5米，最高可达10米以上，灰褐色，光滑，不易开裂；新梢黄褐色，无毛；嫩梢绿色微带红褐。叶片椭圆形，先端渐尖，基部楔形，叶缘锯齿细锐，伞形总状花序。花白色，花柱5或4，基部有长柔毛；4-6朵花集生在短枝顶端。山荆子6月开花，果近球形，直径0.8-1厘米，红色或黄色，脱萼，萼洼有圆形绣斑，果柄长为果实的3-4倍。果实9月中、下旬成熟。山荆子生山坡杂木林中及山谷阴处灌木丛中，海拔在50-1500米，分布于蒙古、朝鲜、俄罗斯西伯利亚等地。喜光，耐寒性极强(有些类型能抗-50℃的低温)，耐瘠薄，不耐盐，深根性，寿命长。树姿优雅娴美，花繁叶茂，白花、绿叶、红枝互相映托美丽鲜艳，是优良的观赏树种。除具有观赏价值外，幼苗可供苹果、花红和海棠果的嫁接砧木；是很好的密源植物；木材纹理通直、结构细致用于印刻雕板、细木工、工具把等；嫩叶可代茶，还可作家畜饲料，果实对痢疾和吐泻具有一定的疗效；也可作培育耐寒苹果品种的原始材料。

野生山荆子存在果实小、酸涩、口感差、品质低、抗病力差、食用价值很小和产量低，以及山荆子常见立枯病和多种虫害等问题，导致其开发利用受到极大限制。

在现有技术中，对山荆子的研究大多集中于种子苗人工繁育、绿化造型和作为砧木嫁接等方面，未发现进行品种改良和新品种(系)培育的相关报道。且因其果实小而酸涩，在食品领域未得到广泛应用，导致人工规模化栽培生产滞后。

发明内容

为了解决上述山荆子存在果实小、酸涩、口感差、品质低、抗病力差、食用价值很小和产量低，以及山荆子常见立枯病和多种虫害等，导致其开发利用受到极大限制等问题，本发明提供一种诱导山荆子花药突变的新品种培育方法。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种诱导山荆子花药突变的新品种培育方法，包括以下步骤：

(1)材料选择与预处理：6月上旬，待野生山荆子显蕾后选取饱满花蕾，将花蕾用75％乙醇涮洗10s后移至饱和次氯酸钠溶液浸泡2min，无菌水冲洗10次，并用无菌滤纸吸干表面水分；接着将花蕾剥开，摘下雄蕊上的花药，将花药分批放入不同浓度的EMS溶液中，浸泡40-120min；最后用无菌水冲花药10次以备接种；

(2)花药胚性愈伤组织的诱导培养：将步骤(1)中经过EMS浸泡后的花药转接到胚性愈伤组织诱导培养基中，并置于光照周期6h·d^-1、光照强度800lx和温度26±2℃条件下培养80天，花药完全脱分化转变成白黄色的胚性愈伤组织；

(3)胚性愈伤组织再分化培养：将步骤(2)中胚性愈伤组织切割成小块，并转接到胚性愈伤组织再分化培养基中继续培养，同时置于光照周期10h·d^-1、光照强度1000lx和温度25±2℃条件下培养60天，胚性愈伤组织分化出具有独立性、两极性、可分离的胚状体；

(4)胚状体发育培养：将步骤(3)中含有胚状体的胚性愈伤组织继续培养25天，胚状体逐渐与胚性愈伤组织脱离；接着将胚状体剥离后转接到胚状体发育培养基中，并置于光照周期12h·d^-1、光照强度1200lx和温度24±2℃条件下进行发育培养，培养至45天胚状体两极化发育成含有根和茎叶的小植株；