[发明专利]卵巢癌诊疗一体化纳米探针BSA-Gd2

说明书

本发明公开了一种卵巢癌诊疗一体化纳米探针BSA‑Gd₂O₃/PTX@Anti‑HE4mAb，本发明制备步骤简单，化疗药物负载率及包封率高，且具有良好的水溶性、稳定性及高T1弛豫效率。对于卵巢癌细胞及卵巢癌荷瘤裸鼠具有良好的靶向性，成功实现对靶向磁共振成像及靶向抗癌作用，还具有良好的生物相容性、低毒性等优点。

技术领域

本发明涉及一种卵巢癌诊疗一体化纳米探针BSA-Gd₂O₃/PTX@Anti-HE4 mAb，属于医学技术领域。

背景技术

卵巢癌(Ovarian carcinoma,oc)是目前世界范围内女性中最致命的妇科恶性肿瘤，其特点是发病率和死亡率都很高。卵巢癌因为缺乏特异性临床症状及生物学指标，通常确诊时已经到达疾病的晚期阶段，而该阶段往往多发生恶性转移到骨盆和腹膜。卵巢癌死亡率高的另一个原因是有限且复杂的治疗措施。目前卵巢癌一线治疗手段是手术切除原发病灶，然后行紫杉醇(Paclitaxel，PTX)和铂类药物联合化疗。PTX是紫杉烷类化疗药物，其水溶性及药代动力学较差使其应用受到限制。因此，研究者开发了各种纳米载体用于PTX的传递。然而，值得注意的是，由于体内不确定的生物相容性导致大部分纳米粒子仍处于试验阶段。因此研究者应着力研发具有更大临床转化潜力的功能性纳米探针。

发明内容

针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种卵巢癌诊疗一体化纳米探针BSA-Gd₂O₃/PTX@Anti-HE4 mAb，制备过程简单、耗材少，可实现卵巢癌靶向磁共振增强成像及靶向治疗。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种卵巢癌诊疗一体化纳米探针BSA-Gd₂O₃/PTX@Anti-HE4 mAb，包括以下步骤：

a.称量BSA、Gd(NO₃)₃·6H₂O及NaOH，然后混合、恒温搅拌；BSA即为牛血清白蛋白，Gd(NO₃)₃·6H₂O即为水合硝酸钆，NaOH即为氢氧化钠；

b.将步骤a中的混合物倒入透析袋中，在超纯水中透析得到BSA-Gd₂O₃纳米粒子；

c.将步骤b中得到的溶液浓缩10倍后用过滤器过滤，过滤后用NaOH将溶液的pH调节至9，然后缓慢加入PTX，再超声作用1.5小时，超声后超滤去除未反应的PTX得 BSA-Gd₂O₃/PTX溶液；PTX即为紫杉醇；

d.将步骤c中所得滤液通过酰胺反应连接单克隆抗HE4抗体，最后对溶液进行超滤，去除未反应杂质后得纳米探针BSA-Gd₂O₃/PTX@Anti-HE4 mAb；HE4即为人类附睾蛋白4。

进一步的，所述步骤a中BSA为250mg，Gd(NO₃)₃·6H₂O为1mL 50mM，NaOH为1mL 2M。

进一步的，所述步骤b中透析总时长为48h，每间隔6h换水一次，共换水8次。

进一步的，所述步骤c中超滤器尺寸为0.45μm，NaOH浓度为0.2M，PTX浓度及用量分别为13mg/mL及10μL。

进一步的，所述步骤d中先将100μL EDC(10mg/mL)加入到20μL单克隆抗HE4抗体(1mg/mL)中，在37℃培养箱中活化15min，之后加入100μL NHS(10mg/mL)、500μL BSA-Gd₂O₃/PTX溶液，最后在上述混合物中加入活化的单克隆抗HE4抗体，在37℃下反应2h。