[发明专利]一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法

权利要求书

1.一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

步骤一： 准确称取2.00~5.00 g充分均质的试样，置于50 mL聚乙烯离心管中；

步骤二：加入10~100 μL的100 ng/mL的内标使用液，移入10~20 mL有机溶剂，匀浆，超声或振荡提取5~20 min，加入适量的无机盐进行盐析，涡旋1 min，以4000~9000 r/min 的转速离心5~10 min，将上清液转移至塑料离心管中，待净化；

步骤三：上述上清液移入加有适量净化粉的离心管中净化，涡旋1~5 min，放置澄清，取5~20 mL上清液于另一10 mL塑料离心管中，在35~45 ℃条件下氮吹至干，用合适溶剂复溶至1.0 mL，涡旋复溶后过0.18~0.22 μm滤膜，供超高效液相色谱串联质谱仪测定；相同方法制备空白试液。

2.根据权利要求1的一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于：所述的步骤二中内标物为6-苄基腺嘌呤-D₅。

3.根据权利要求1的一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于：所述的步骤二中提取用的有机溶剂为甲醇、1%(体积分数)乙酸-甲醇溶液、乙腈、1%(体积分数)乙酸-乙腈溶液、乙酸乙酯中的一种或几种。

4.根据权利要求1的一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于：所述的步骤二中无机盐为氯化钠、无水硫酸镁、无水硫酸钠、柠檬酸二氢钠中的一种或几种；适量无机盐为1 g~5 g。

5.根据权利要求1的一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于：所述的步骤三中净化粉为无水硫酸镁、乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）、石墨化碳黑（GCB）、C18的一种或几种；适量的净化粉为10 mg~1.2 g。

6.根据权利要求1的一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中的6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于：所述的步骤三中合适溶剂为10%甲醇-水（V/V，含0.1%甲酸）。

7.根据权利要求1的一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于：所述的步骤三中高效液相色谱串联质谱测定条件：

色谱柱：Waters ACQUITY BEH C18 (50 mm×2.1 mm,1.7 μm)柱；柱温为20~40 ℃；

流动相：0.1%甲酸-水溶液（V/V）（A）和乙腈（B）；流速：0.2~0.5 mL/min；

样品室温度：8~10 ℃，进样体积为3~5 μL，检测时间5 ~10 min；

梯度洗脱条件为0~0.2 min：5% (B相)，0.2~2 min：5%~80% (B相)，2~2.1 min：80%~90%(B相)，2.1~3 min：90% (B相)，3~3.1 min：90%~5% (B相)，3.1~5 min：5%(B相)；

离子源：电喷雾电离（ESI）；扫描方式：正离子；离子源温度：500 ℃；毛细管电压：1.0kV；锥孔电压：3.5 kV；去溶剂气(高纯氮气)流速：800 L/h；

定量方式：多反应监测模式(multi reaction monitor, MRM)；同位素内标法；6-苄基腺嘌呤定量离子对（M/Z）：226.291.1，定性离子对（M/Z）：226.2148.0；6-苄基腺嘌呤-D₅定量离子对（M/Z）：231.296.1。