[发明专利]一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法

说明书

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种用于测定食品中6‑苄基腺嘌呤的方法。本发明主要采用6‑苄基腺嘌呤对应的稳定同位素内标物6‑苄基腺嘌呤‑D₅进行定量，有机溶剂对试样中6‑苄基腺嘌呤进行提取，QuEChERS法进行净化，最后采用超高效液相色谱‑串联质谱仪进行检测。本方法具有操作简单、结果稳定、检出限低、抗干扰能力强等特点，能快速实现食品中6‑苄基腺嘌呤的定性定量检测，为食品安全监管尤其是豆芽的安全监管提供技术支持，具有较好的推广价值。

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中6-苄基腺嘌呤的方法。

背景技术

6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine，6-BA)是人工合成的细胞分裂素，分子式为C₁₂H₁₁N₅， 它能够抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老；还具有将氨基酸、生长素、 无机盐等向处理部位调运等多种效能，对植物的生长、发育有着促进与调节作用，其广泛用 于植物组织的培养、果实生长及蔬菜保鲜等。然而人体摄入过多会刺激皮肤、粘膜、食道或 造成胃黏膜损伤，出现恶心、呕吐等现象,甚至致癌、致畸。欧洲食品安全局(EFSA)规定 植物来源的食品中6-苄基腺嘌呤最大残留量(MRL)为0.01mg/kg。目前我国的标准GB2760 已经禁止6-苄基腺嘌呤作为食品加工助剂生产经营和使用。

目前，食品中的6-苄基腺嘌呤残留量的检测常用的净化方法主要有液液萃取、固液萃 取、固相萃取法等。相较于以上前处理方法，QuEChERS法因操作简便，所需溶剂少，提取 效率高等优点得到广泛应用。检测方法主要以高效液相色谱、液相色谱串联质谱法为主。现 阶段运用较为广泛的是高效液相色谱法，我国现行国标GB/T 23381-2009《食品中6-苄基腺嘌 呤的测定-高效液相色谱法》规定的检测方法为液相色谱法。液相色谱法存在以下不足：(1) 对前处理要求高，主要通过固相萃取法进行净化。固相萃取净化时，SPE小柱容易堵塞，操 作复杂，且消耗有机试剂多，对环境造成极大污染，检测成本高，且对专业要求高。(2)液 相色谱法因抗干扰能力差容易出现假阳性。(3)液相色谱法检出限高。液相色谱串联质谱法 由于其灵敏度高，专属性强等特点，逐渐取代液相色谱法而被广泛用于复杂基质中的目标物 检测。但是6-苄基腺嘌呤受基质影响较大，需要采用基质匹配工作曲线才能准确定量。但阴 性样品一般不易获得，需提前准备，同时整个实验过程回收率低、操作繁琐，结果稳定性差， 对仪器污染大。因此，开发一种简单、快速、实用的检测方法，对于控制食品，尤其是豆芽 中6-苄基腺嘌呤的残留量，保障食品安全和人身健康，具有重要意义。

发明内容

本发明目的就是为了解决上述背景问题中提出的问题，开发一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中的6-苄基腺嘌呤残留量的方法，该方法具有简单、快速、抗干扰能力强、检出限低等特点。

为实现上述发明目的，本方法采用以下技术方案：一种QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中的6-苄基腺嘌呤残留量的方法；

步骤一： 准确称取2.00~5.00 g充分均质的试样，置于50 mL聚乙烯离心管中；

步骤二：加入10~100 μL的100 ng/mL的内标使用液，移入10~20 mL有机溶剂，匀浆，超声或振荡提取5~20 min，加入适量的无机盐进行盐析，涡旋1 min，以4000~9000 r/min 的转速离心5~10 min，将上清液转移至塑料离心管中，待净化；

步骤三：上述上清液移入加有适量净化粉的离心管中净化，涡旋1~5 min，放置澄清，取5~20 mL上清液于另一10 mL塑料离心管中，在35~45 ℃条件下氮吹至干，用合适溶剂复溶至1.0 mL，涡旋复溶后过0.18~0.22 μm滤膜，供超高效液相色谱串联质谱仪测定。相同方法制备空白试液。

所述的食品为绿豆芽、黄豆芽、黄瓜、西红柿、菠菜、葡萄、樱桃中的一种。