[发明专利]一种利用微生物发酵法提取白术多糖的方法

说明书

本发明公开了一种利用微生物发酵法提取白术多糖的方法，所述方法为：将米根霉(Rhizopus oryzae)GDMCC No:60990孢子接种于含无菌水的白术粉中，于28–30℃发酵2–3d，发酵物经超声水提后浓缩，获得浓缩物；浓缩物经醇沉和真空干燥后，获得白术粗多糖。在白术多糖超声水提前，增加了米根霉CH5的发酵预处理。米根霉CH5在白术粉中适度生长，产生一些多糖水解酶，对白术不溶性多糖结构组织的水解，促进结合态可溶性多糖的解离，在热水超声浸提时更容易溶出。较不采用发酵预处理的常规方法相比，白术多糖的提取收率可以提高50％以上。

(一)技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种微生物发酵技术在白术多糖提取中的应用。

(二)背景技术

中药白术(Atractylodis Macrocephalae Rhizoma)，又称于术、冬术、浙术、山蓟、山精等，为菊科植物白术(Atractylodes macrocephala Koidz)的干燥根茎。白术是传统的药食两用的中药材，收载于2015中国药典一部，其性味苦、甘，温；归脾、胃经；具有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎之功效。主治脾虛食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安。白术用途广泛，除了中药组方用药外，还是40多种中成药制剂的重要原料；此外，民间通常以之代茶饮、泡酒、烹调佳肴等，是一种良好的功能保健食品材料。

白术主要化学成分包括白术多糖、白术内酯、苍术醇、苍术酮等，其中，白术多糖的活性备受人们关注。现代药理学研究表明，白术多糖具有抗肿瘤，抗氧化，抗高血压、降血糖和免疫调节活动等功能。中成药玉屏风口服液的药效成分之一就是白术多糖提取物，有健脾益气之功效。作为一种植物性功能多糖，白术多糖在医疗和保健方面的应用前景广阔。

目前，常见的白术多糖的提取方式主要有热水浸提法、超声提取法和酶提取法等。不同的提取工艺有各自的优缺点，多糖的收率也差异较大。热水浸提法的耗时长且多糖提取率低；酶提取法虽然可以获得较高的多糖收率，但酶的成本高，限制了它的广泛应用；超声提取法是在热水浸提的基础上，增加超声浸提步骤，提取收率相对较高，因此具有相对的优势。为了进一步提高白术多糖的提取收率，本发明对白术多糖超声提取法工艺进行改进，增加微生物发酵预处理步骤，从而提高了白术多糖的提取收率。

(三)发明内容

本发明目的将微生物发酵技术应于白术多糖的超声提取中，从而显著提高白术多糖提取收率。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种利用微生物发酵法提取白术多糖的方法，所述方法为：将米根霉(Rhizopusoryzae)GDMCC No:60990孢子接种于含无菌水的白术粉中，于28–30℃发酵2–3d，发酵物经超声水提后浓缩，获得浓缩物；浓缩物经醇沉和真空干燥后，获得白术粗多糖。

进一步，所述无菌水体积用量以白术粉重量计为2–3mL/g；所述米根霉CH5孢子接种量以白术粉重量计为2–5×10⁷个/g；所述白术粉是将白术粉碎后过60目筛获得。

进一步，所述米根霉CH5孢子以孢子液的形式加入，所述孢子液的制备方法为：低温保藏的米根霉CH5接种于PDA平板培养基，于28–30℃恒温培养2–3d后，加入无菌水于培养皿中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液；优选将孢子液转移到无菌试管中，用无菌水调整孢子浓度为2–5×10⁸个/mL。所述的PDA平板培养基(马铃薯蔗糖琼脂培养基)终浓度组成为：马铃薯200g/L(煮沸30min后过滤留汁)，蔗糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为自来水，pH自然(实测6.5)。

进一步，所述浓缩物的制备方法为：发酵物加入去离子水，搅拌均匀后置于80–90℃恒温水浴锅中浸提3–5h后，转入水温80℃的超声波清洗机中，100–200W超声提取20–30min；超声水提结束后，趁热过滤，将滤液65℃减压浓缩至原体积的1/4–1/5，获得浓缩物；所述去离子水体积加入量以发酵前白术粉重量计为20–30mL/g。