[发明专利]一种病毒纯化方法及经由该方法制备得到的二联灭活疫苗

权利要求书

1.一种病毒纯化的方法，其特征在于，包括：

(1)将所述病毒的病毒液进行离心、过滤得到上清液作为待浓缩样品；

(2)将所述待浓缩样品通过100KD膜包进行浓缩，获得病毒浓缩液；

(3)将所述病毒浓缩液利用4FF凝胶层析柱进行纯化得到纯化后的病毒液；

所述病毒为猪流行性腹泻病毒或猪传染性胃肠炎病毒。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，采用贴壁Vero细胞培养所述猪流行性腹泻病毒，和/或，采用贴壁ST细胞培养所述猪传染性胃肠炎病毒。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述浓缩为将所述待浓缩样品浓缩10～15倍。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)的方法如下：

将所述待浓缩样品移至样品处理罐中，循环5～10min，保持进液端压力维持在0.05～0.1MPa，打开透过端持续透过100KD膜包，待样品体积浓缩至上样体积的1/10～1/40时，补加与剩余体积相同的医用生理盐水溶液进行洗滤，循环5～10min，打开透过端持续透过100KD膜包；重复多次所述洗滤流程，循环2～5min后得到所述病毒浓缩液。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)为对所述病毒液进行连续流离心、膜过滤后取上清液作为所述待浓缩样品。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述4FF凝胶层析柱的填料为Sepharose 4FF琼脂糖凝胶层析填料。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(3)中的纯化条件为：病毒浓缩液上样的线性流速为30～80cm/h，压力小于2.5bar，上样量控制在10％～15％柱体积，洗脱采用医用生理盐水溶液。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(3)的方法为：

用0.5～1.0mol/L NaOH溶液对分子筛凝胶层析柱清洗消毒，再用无菌水冲洗至pH为7.0～7.5，然后用医用生理盐水溶液平衡分子筛凝胶层析柱至柱前柱后电导率一致，pH稳定在7.0，紫外检测UV₂₈₀基线平稳，最后将步骤(2)所得病毒浓缩液上样，用医用生理盐水溶液洗脱，待UV₂₈₀值开始回升时，收集第一个蛋白峰，即为所述纯化后的病毒液。

9.一种二联灭活疫苗，其特征在于，包括灭活的权利要求1-9任一项所述方法纯化的猪流行性腹泻病毒、灭活的权利要求1-9任一项所述方法纯化的猪传染性胃肠炎病毒以及201佐剂。

10.根据权利要求9所述的二联灭活疫苗，其特征在于，所述灭活的权利要求1-9任一项所述方法纯化的猪流行性腹泻病毒、所述灭活的权利要求1-9任一项所述方法纯化的猪传染性胃肠炎病毒以及所述201佐剂的配比为2：1：3。