[发明专利]一种CRISPR-Cpf1介导实现多个免疫卡控点基因编辑免疫细胞的试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 202010302913.4 | 申请日： | 2020-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN111440799B | 公开（公告）日： | 2021-03-02 |
| 发明（设计）人： | 徐振宇;何连君;黄后宝;肖占刚 | 申请（专利权）人： | 皖南医学院第一附属医院（皖南医学院弋矶山医院） |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/85;C12N5/10;C12N15/90;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 南京灿烂知识产权代理有限公司 32356 | 代理人： | 赵丽 |
| 地址： | 241001*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 crispr cpf1 实现 免疫 卡控点 基因 编辑 细胞 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种用于敲除免疫细胞内的多重免疫卡控点的S-sgRNAs分子，其特征在于，其靶向敲除PD-1、CTLA-4和TIM-3的多重免疫卡控点，或靶向敲除PD-1和CTLA-4的多重免疫卡控点；所述S-sgRNAs分子由靶向不同基因的sgRNA串联而成，其中不同sgRNA之间由可被真核细胞胞内切割的xcrRNA隔开，所述的xcrRNA序列为：5’AUUUCUACUCUUGUAG3’； 所述S-sgRNAs分子如SEQ ID NO.59或SEQ ID NO.60所示。
2.包含权利要求1所述的S-sgRNAs分子的载体。
3.一种用于同时敲除免疫细胞中多种免疫卡控点的试剂，其特征在于，包括权利要求1所述的S-sgRNAs分子或者权利要求2所述的载体。
4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，还包括AsCpf1蛋白。
5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含第一成分和第二成分，第一成分为权利要求1所述的S-sgRNAs分子或权利要求2所述的载体，第二成分为AsCpf1蛋白，根据需要选取第一成分中的某一容器与第二成分中的AsCpf1蛋白进行组合；
所述试剂盒第一成分包含以下内容：
(a) 第一容器以及位于所述第一容器内的SEQ ID NO.59所示的S-sgRNAs或对应的DNA表达载体；
(b) 第二容器以及位于所述第二容器内SEQ ID NO.60所示的S-sgRNAs或对应的DNA表达载体。
6.一种反应混合物，其包含：(a)如权利要求1所述的S-sgRNAs分子、如权利要求2所述的载体、如权利要求3或4所述的试剂或者如权利要求5所述的试剂盒，以及(b)免疫细胞。
7.权利要求1所述的S-sgRNAs分子、权利要求2所述的载体、权利要求3或4所述的试剂、权利要求5所述的试剂盒在制备敲除免疫细胞内的多重免疫卡控点的药物中的应用。
8.权利要求1所述的S-sgRNAs分子、权利要求2所述的载体、权利要求3或4所述的试剂、权利要求5所述的试剂盒在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用。
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