[发明专利]一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法和应用

权利要求书

1.一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：称取适量三氯化铁、聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-顺丁烯二酸)钠盐和乙酸钠溶于超纯水和乙二醇的混合溶液中，室温下搅拌直到溶液呈现均匀的黄色，然后在上述溶液中继续加入氢氧化钠，持续搅拌至完全溶解，接着在溶液中加入四氟乙烯，置于不锈钢高压釜中进行水热反应，反应结束后待反应溶液冷却至室温，利用磁铁对固体产物进行分离并洗涤，最后分散于水溶液中，得到含Fe₃O₄磁性纳米颗粒的水溶液；

S2：在步骤S1制备的含Fe₃O₄磁性纳米颗粒的水溶液中加入氢氧化铵和乙醇，超声处理后将混合溶液进行连续搅拌，搅拌过程中每隔20分钟向混合溶液中滴加正硅酸乙酯，利用磁铁对固体颗粒进行分离并洗涤，得到Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒；

S3：取肿瘤细胞株进行培养，待细胞生长至90%密度，用细胞刮收集肿瘤细胞于PBS溶液中，离心后收集细胞沉淀，将肿瘤细胞沉淀用低渗裂解液进行重悬，并在液氮中反复冻融以获得肿瘤细胞裂解液，然后将瘤细胞裂解液依次通过低速离心去除细胞核，高速离心去除细胞质，最后在用4℃预冷的PBS溶液重悬，离心后得到纯化的肿瘤细胞膜；

S4：将步骤S2制备的Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒与步骤S3制备的肿瘤细胞膜进行超声波处理后混合，采用囊泡发生器对混合溶液进行挤压，在将挤压后的混合液进行离心处理，获得肿瘤细胞膜包裹的磁性纳米微载体。

2. 根据权利要求1所述的一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中，三氯化铁、聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-顺丁烯二酸)钠盐、乙酸钠和氢氧化钠的质量比为0.26 : 0.4 : 1.2 : 0.24。

3. 根据权利要求1所述的一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中，超纯水和乙二醇的体积比为0.06 : 16。

4. 根据权利要求1所述的一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中，所述氢氧化铵和乙醇的体积比为2 : 40。

5. 根据权利要求1所述的一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，将混合溶液进行连续搅拌具体是指：50℃水浴下以600 rpm搅拌1小时。

6. 根据权利要求1所述的一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，低速离心具体是指：在4℃，4100 rpm下离心10分钟；高速离心具体是指：4℃，18000 rpm下离心1小时。

7. 根据权利要求1所述的一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，低渗裂解液的具体配置为：每1mL细胞裂解液中加入1 μL二硫苏糖醇、10 μL苯甲基磺酰氟、1 μL蛋白酶抑制剂和5 μL磷酸酶抑制剂。

8.根据权利要求1所述的一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，肿瘤细胞膜为多种肿瘤细胞或者肿瘤组织来源的细胞膜成分。

9.权利要求1所述方法制备的包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体在制备传递肿瘤特异性抗原生物材料中的应用。