[发明专利]一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法和应用，该方法基于肿瘤细胞膜，通过膜‑纳米共挤压和离心的方法将肿瘤细胞衍生的细胞膜包被在二氧化硅修饰的四氧化三铁纳米颗粒表面，形成肿瘤细胞膜包裹的Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米微载体（CMNPs）。所述的磁性纳米微载体包含肿瘤细胞膜表面抗原，且具有超顺磁性，可利用磁场进行富集和纯化，从而能够体外刺激免疫细胞的活化或注入体内被巨噬细胞捕获以提呈肿瘤特异性抗原，增强抗肿瘤效应。这种基于细胞膜的微载体制备方法具有操作简易，成本低廉，应用广泛等优点。

技术领域

本发明涉及生物医用材料领域，具体涉及一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法和应用。

背景技术

肿瘤免疫疗法是通过刺激人体自身的免疫系统有效地杀死肿瘤的方法，已成为未来“治愈”癌症的希望。近年来，一些新兴的癌症免疫疗法包括单克隆抗体（mAb）免疫检查点阻断法，过继细胞疗法和癌症疫苗等，改变了癌症治疗的传统手段，并取得鼓舞人心的临床疗效。其中，过继细胞治疗是一种有临床应用前景的疗法，即将自体免疫细胞从人体分离出，在体外进行激活或者增加其肿瘤特异性，然后再回输给患者直接杀死肿瘤细胞或刺激机体产生肿瘤特异性免疫反应。

近年来，一些非特异性的细胞因子诱导的杀伤性T细胞（CIK），自然杀伤细胞（NK）及嵌合抗原受体修饰的T细胞（CAR-T）等过继疗法相继出现，在针对白血病等恶性血液疾病中展现出“治愈性”的疗效，患者的生存时间明显延长。相比传统肿瘤治疗手段易产生较大的副作用的缺点，过继性细胞疗法具有疗效好、低毒副作用、无耐药性的显着优势，成为肿瘤免疫治疗领域最具有前景的研究方向之一。

基于过继性细胞疗法取得了巨大的成功，但由于免疫细胞的非特异性，无法完全靶向至肿瘤组织，使肿瘤患者容易复发或耐受，因此，亟待开发出具有显著杀伤活性和低副作用的新型肿瘤免疫疗法。肿瘤细胞膜作为新型的肿瘤抗原载体，能够为免疫系统提供肿瘤细胞表面的抗原信息，实现免疫系统的预先敏化而抑制肿瘤的生长。然而，单独的肿瘤细胞膜抗原存在呈递效率低、抗原易丢失等缺点，限制其在临床上的应用。因此，有必要开发出新型、有效的肿瘤特异性抗原提呈平台，在癌症过继免疫治疗中发挥出巨大潜力。

发明内容

本发明的目在于解决传统肿瘤抗原呈递效率低、抗原易丢失的问题，提供一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：

一种包裹肿瘤细胞膜的磁性纳米微载体的制备方法，包括以下步骤：

S1：称取适量三氯化铁、聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-顺丁烯二酸)钠盐和乙酸钠溶于超纯水和乙二醇的混合溶液中，室温下搅拌直到溶液呈现均匀的黄色，然后在上述溶液中继续加入氢氧化钠，持续搅拌至完全溶解，接着在溶液中加入四氟乙烯，置于不锈钢高压釜中进行水热反应，反应结束后待反应溶液冷却至室温，利用磁铁对固体产物进行分离并洗涤，最后分散于水溶液中，得到含Fe₃O₄磁性纳米颗粒的水溶液；

S2：在步骤S1制备的含Fe₃O₄磁性纳米颗粒的水溶液中加入氢氧化铵和乙醇，超声处理后将混合溶液进行连续搅拌，搅拌过程中每隔20分钟向混合溶液中滴加正硅酸乙酯，利用磁铁对固体颗粒进行分离并洗涤，得到Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒；

S3：取肿瘤细胞株进行培养，待细胞生长至90%密度，用细胞刮收集肿瘤细胞于PBS溶液中，离心后收集细胞沉淀，将肿瘤细胞沉淀用低渗裂解液进行重悬，并在液氮中反复冻融以获得肿瘤细胞裂解液，然后将瘤细胞裂解液依次通过低速离心去除细胞核，高速离心去除细胞质，最后在用4℃预冷的PBS溶液重悬，离心后得到纯化的肿瘤细胞膜；