[发明专利]一种用于2019新冠病毒核酸检测的假病毒的制备方法有效
申请号: | 202010304974.4 | 申请日: | 2020-04-17 |
公开(公告)号: | CN111471717B | 公开(公告)日: | 2021-05-04 |
发明(设计)人: | 刘骏;周春艳;金丽;谢伟建;徐金凤 | 申请(专利权)人: | 复百澳(苏州)生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/867 | 分类号: | C12N15/867;C12N15/50;C12N7/01 |
代理公司: | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人: | 张黎 |
地址: | 215123 江苏省苏州市苏州工业*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 2019 病毒 核酸 检测 制备 方法 | ||
1.一种用于2019新冠病毒核酸检测的假病毒的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤SS01:剔除慢病毒表达载体中非必需的启动子和外源表达框;
步骤SS02:将2019新冠病毒的部分基因组克隆至假病毒载体:以基因合成的方式获得2019新冠病毒的ORF1 A/B基因、E基因和N基因,合成顺序为ORF1 A/B基因-E基因-N基因,合成序列为SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列,通过酶切连接的方式插入慢病毒表达载体中;
步骤SS03:慢病毒包装辅助质粒的整合酶基因进行突变,使慢病毒的整合能力降低或丧失整合性;
步骤SS04:在293T细胞中进行假病毒的包装,获得假病毒颗粒;
步骤SS05:对制备假病毒的产毒量和整合效率检测;
所述步骤SS03中进行突变的方法为:以慢病毒包装辅助质粒psPAX2为模板进行点突变,将64位氨基酸Asp突变成Asn,并将262位-264位氨基酸Arg,Arg,Lys突变成Ala,Ala,His,突变后的核苷酸序列为SEQ ID NO:6所示的序列。
2.如权利要求1所述的制备方法制备得到的假病毒在制备核酸检测的标准质控品中的应用。
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