[发明专利]一种TaqMan探针法的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测CHO宿主细胞DNA残留的反应体系，其特征在于，所述的反应体系为实时荧光定量PCR反应体系，包含SEQ IDNO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物组成的引物对和SEQ ID NO:3所示的探针。

2.权利要求1所述的反应体系在制备CHO宿主细胞DNA残留检测的试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的CHO宿主细胞DNA残留检测是适用于CHO细胞表达或生产的治疗蛋白质药物。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的治疗蛋白质药物为重组疫苗或单克隆抗体。

5.一种用于检测CHO宿主细胞DNA残留的方法，其特征在于，所述的方法为：使用权利要求1所述的反应体系对待测样本提取DNA后进行实时荧光定量PCR，根据所获得的标准曲线，计算得到待检样本中CHO细胞DNA的量。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的待测样本可为CHO细胞表达或生产的治疗蛋白质药物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的治疗蛋白质药物为重组疫苗或单克隆抗体。

8.一种TaqMan探针法的CHO宿主DNA残留检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含CHO DNAControl，DNADilution Buffer，2x MaxDetect qPCR Mix，10x CHO DetectionMix；所述的DNADilution Buffer中含有NaN₃；所述的10x CHO Detection Mix中含有权利要求1所述的引物对和SEQ ID NO:3所示的探针。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的CHO DNAControl浓度为30ng/μL。

10.权利要求8所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤： a)样本通过前处理试剂盒提取DNA后，利用DNADilution Buffer稀释到合适浓度； b)将CHO DNA Control利用DNADilution Buffer十倍梯度稀释，生成6个浓度的标准品：300pg/μL，30pg/μL，3pg/μL，300fg/μL，30fg/μL，3fg/μL； c)根据要检测的数量配置PCR反应混合液，依次加入Negative Control(water)，10xCHO Detection Mix，2x MaxDetect qPCR Mix，混匀后分装于用作荧光定量PCR的0.2mL的八连管或96孔板中； d)将阴性对照，a)中稀释好的样本，b)中稀释好的标准品依次加入已分装的PCR反应混合液中，混匀后放入定量PCR仪进行检测；e)根据检测结果绘制标准曲线，计算待测样本中含有的CHO宿主DNA的浓度。

11.根据权利要求10所述的使用方法，其特征在于，所述的DNADilution Buffer中NaN₃的含量比例是1/10000。