[发明专利]一种快速制备人玻璃粘连蛋白的方法及应用

权利要求书

1.一种玻璃粘连蛋白的制备方法，其特征在于，依次包括如下步骤：

S1：细菌培养；

S2：得到包涵体；

S3：亲和层析；

S4：清洗杂蛋白后柱上复性；

S5：清洗细菌内毒素；

S6：洗脱步骤，得到玻璃粘连蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S2中，将S1培养得到的细菌通过超声破碎，得到包涵体。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S3中，包括：

S31：用水洗肝素琼脂糖柱后用变性剂缓冲液对肝素琼脂糖柱进行平衡，肝素琼脂糖柱平衡好后备用；

S32：将包涵体用变性缓冲液溶解后，离心去沉淀，得到上清液；

S33：将上清液与肝素琼脂糖凝胶混合得到混合液，将混合液过S31中的已平衡的肝素琼脂糖柱，得到流穿样品。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S4中，包括：

S41：用变性剂缓冲液洗去未结合的玻璃粘连蛋白和其他杂蛋白，洗至OD280nm≤0.02mg/ml为止；

S42：再柱上梯度洗去变性剂，使得玻璃粘连蛋白复性。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在S41中，所述变性剂缓冲液包含氯化钠；优选的，所述氯化钠的浓度为25-200mM。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在S42中，设置4～5个洗涤梯度依次去除变性剂，每个梯度设置10～15个柱体积，过柱流速为2ml/min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S5中，包括：使用去污剂柱上去除细菌内毒素；所述去污剂选自C7BzO、Triton X-114、lgepal CA-630、异丙醇、1,2-己二醇、ASB-14或CHAPS中的一种或任意组合。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用氯化钠溶液进行洗脱，实时监测OD280nm值变化，当浓度小于0.3mg/ml时，停止收样。

9.据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S2和S3之间还包括如下步骤：

将上述获得的包涵体用包涵体清洗液Ⅰ和包涵体清洗液Ⅱ分别清洗一次；所述包涵体清洗液Ⅰ包括Tris-Hcl(pH8.5)10mM-50mM，NaCl450-650mM，Urea120g-240g，EDTA5mM-10mM，DTT5mM-10mM，CA-6300.1％-1％；包涵体清洗液Ⅱ包括Tris-Hcl(pH8.5)10mM-50mM，NaCl50-100mM，Urea120g-240g，EDTA5mM-10mM，DTT5mM-10mM。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法得到的玻璃粘连蛋白。

11.一种大规模培养细胞的方法，其特征在于，使用权利要求10所述的玻璃粘连蛋白包被细胞培养材料；优选的，所述细胞为人多能干细胞和神经前体细胞。