[发明专利]一种副干酪乳杆菌坚韧亚种菌株、筛选方法及用途

说明书

本发明属于微生物技术领域，公开了一种副干酪乳杆菌坚韧亚种菌株、筛选方法及用途，所述副干酪乳杆菌坚韧亚种菌株的筛选方法包括：将待筛乳杆菌选菌株放入盛有初筛培养基的培养皿中恒温培养，将初筛后得到的乳杆菌接种至新鲜牛奶中发酵培养，获取发酵组合物；进行抑菌活性检测；将通过活性检测的单菌落分别置于初筛培养基和厌氧培养基中继续培养，即可得到具有良好抗菌活性的副干酪乳杆菌坚韧亚种FX‑6‑1菌株。本发明提供的副干酪乳杆菌坚韧亚种菌株的筛选方法简单可行，操作成本低，能够获得广谱高效的新型抗菌物质，推动其开发和应用，具有广阔的市场。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种副干酪乳杆菌坚韧亚种菌株、筛选方法及用途。

背景技术

目前，在加工、贮藏、运输及消费过程中，导致食品腐败变质的原因较多，有物理因素、化学因素和生物性因素，其中由微生物污染所引起的食品腐败变质是最为重要和普遍的。微生物滋生导致食品腐败变质的同时，也给食品安全带来严重危害。虽然传统的加热杀菌可以有效抑制微生物的污染，但在杀菌的同时也不同程度的破坏了食品的营养、质地以及色香味型，同时产生大量能耗。在现代食品工业中，食品防腐剂被广泛应用于延长食品的保藏期，已成为现代食品生产中一种不可缺少的食品添加剂。而在现代食品工业以及种植、养殖业中，化学防腐剂、杀虫剂及抗生素的不规范使用及残留隐患已越来越引起消费者关注，人们更倾向于消费天然来源的食品资源。

副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)，兼性厌氧、不运动、无芽孢的杆菌或长杆菌，革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性。副干酪乳杆菌广泛存在于传统发酵乳制品和人体胃肠道中，具有调节肠道菌群平衡、增强免疫功能、预防疾病等生理功能。而现有副干酪乳杆菌的筛选方法尚未见报道。

因此，针对食品工业中化学防腐剂存在的问题以及对广谱高效天然防腐保鲜剂的需求状况，亟需一种从待筛选菌液中分离筛选具有抗菌活性的副干酪乳杆菌菌株的方法。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有副干酪乳杆菌的筛选方法尚未见报道；同时，食品工业中广泛存在化学防腐剂的问题，亟需广谱高效天然防腐保鲜剂。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种副干酪乳杆菌坚韧亚种菌株、筛选方法及用途。

本发明是这样实现的，一种副干酪乳杆菌坚韧亚种菌株的筛选方法，所述副干酪乳杆菌坚韧亚种菌株的筛选方法包括以下步骤：

步骤一，初筛：将待筛乳杆菌选菌株放入盛有初筛培养基的培养皿中，并将培养皿放入30～35℃的恒温摇床中培养4～5天；

步骤二，接种培养：将经过初筛培养后得到的乳杆菌接种至新鲜牛奶中，并置于30～35℃的生化培养箱中发酵培养3～4天，获得发酵组合物；

步骤三，活性检测：将发酵组合物挑取划线分离，以大肠杆菌为指示菌，对得到的单菌落进行抑菌活性试验检测；

步骤四，将通过活性检测的单菌落放至初筛培养基中，摇床培养8～10天；取2ml培养后的菌液置于放有厌氧培养基的厌氧瓶中培养25～30天；

步骤五，将厌氧瓶放至30℃厌氧培养罐中培养20天，在培养的过程中持续充入氮气，得到具有良好抗菌活性的副干酪乳杆菌坚韧亚种FX-6-1菌株。

进一步，步骤一中，所述初筛培养基的制备方法为：

(1)按质量份数将Na₂S₂O₃10～15份、KNO₃8～12份、(NH₄)₂HPO₄5～7份、半胱氨酸1～2份进行混合，得到混合液；

(2)在混合液中加入5％碱性复红乙醇溶液，调节pH值为7.2-7.4；