[发明专利]一种评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法

权利要求书

1.一种评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)：准备猴头菇β-葡聚糖；

步骤2)：准备粪便供试液：将粪便加入到PBS溶液中，蜗旋混匀，然后过滤，去除大颗粒，获得粪便悬浊液；

步骤3)：猴头菇β-葡聚糖体外粪便发酵：将粪便悬浊液接种于猴头菇β-葡聚糖制成的发酵培养基中，37℃厌氧发酵，对肠道微生物进行体外培养；

步骤4)：发酵液中肠道微生物对猴头菇β-葡聚糖的代谢产物的响应值的检测：采用气相色谱法检测肠道微生物的代谢产物的含量；

步骤5)：高通量测序：取待测粪便各，将猴头菇β-葡聚糖以及低聚果糖分别接种于步骤3)所得的发酵培养基中进行体外粪便发酵后，提取基因组DNA，以该基因组DNA为模板选择16SrDNA的V3-V4区域进行扩增测序，进行高通量测序。

2.如权利要求1所述的评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，所述步骤1)中猴头菇β-葡聚糖的制备方法为：采用水提醇沉的方法，先将猴头菇粉与水按照重量比混合，加热蒸煮后浓缩，高速离心得到沉淀，用蒸馏水溶解该沉淀物，并透析2～3天，透析液冷冻干燥后即得猴头菇β-葡聚糖。

3.如权利要求1所述的评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，所述步骤2)中的粪便为人类粪便，其样品提供者在采样前2个月内未服用过抗生素或益生元；所述PBS溶液使用前经灭菌、厌氧处理；所述PBS溶液的pH值为7.0，浓度为0.1M；所得粪便悬浊液的浓度为0.1g/mL。

4.如权利要求1所述的评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，所述步骤2)中过滤所采用的滤网规格为800目。

5.如权利要求1所述的评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，所述步骤3)中发酵培养基为含4g/L猴头菇β-葡聚糖的基础培养基，其包括：蛋白胨5g/L，酵母提取物2.5g/L，NaCl 2g/L，CaCl₂ 0.1g/L，K₂HPO₄ 0.25g/L，MgSO₄ 0.1g/L，半胱氨酸盐酸盐0.8g/L，血红素0.05g/L，刃天青0.1mg/L、生物素10μg/L、吐温-80 2.0mL/L，溶剂为去离子水，pH值自然。

6.如权利要求1所述的评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，所述步骤4)中猴头菇β-葡聚糖的代谢产物为短链脂肪酸。

7.如权利要求6所述的评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，所述猴头菇β-葡聚糖的代谢产物为乙酸、丙酸和丁酸中的至少一种。

8.如权利要求1所述的评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，所述步骤4)中的气相色谱法以巴豆酸偏磷酸溶液为内标与酸化剂。

9.如权利要求8所述的评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，所述巴豆酸偏磷酸溶液的浓度为75mM。

10.如权利要求1所述的评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，所述步骤5)中的发酵时间为24h。