[发明专利]一种评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法

说明书

本发明公开了一种评估猴头菇β‑葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，准备猴头菇β‑葡聚糖、粪便供试液；猴头菇β‑葡聚糖体外粪便发酵：将粪便悬浊液接种于猴头菇β‑葡聚糖中，37℃厌氧发酵，对肠道微生物进行体外培养；检测发酵液中肠道微生物对猴头菇β‑葡聚糖的代谢产物的响应值；然后进行高通量测序。本发明通过猴头菇β‑葡聚糖粪便菌群体外发酵过程中短链脂肪酸的产量变化，以及通过高通量测序检测粪便菌群体外发酵中微生物种属的变化，提供了与猴头菇β‑葡聚糖利用能力显著相关的4种肠道微生物菌属，通过菌属的变化以此判断猴头菇β‑葡聚糖对健康的影响。

技术领域

本发明涉及一种猴头菇β-葡聚糖在调节动物肠道菌群中的用途，具体涉及一种利用肠道菌群体外粪便发酵和微生物测序结果评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法。

背景技术

猴头菇(Hericium erinaceus)又名猴头菌、刺猬菌等，是一种珍贵的药食两用菌，包含多种维生素及9种人体必需的氨基酸；猴头菇还具有多种生物活性物质，如多糖、寡糖、氨基酸、甾醇类、萜类和酚类等；同时猴头菇还具有很高的保健价值，具有抗氧化、提高免疫力、抗衰老等多种生物学功能。猴头菇β-葡聚糖(HEBG)是猴头菇多糖中重要组成成分，具有降血糖、抗氧化、加速伤口愈合等多种功效。近年来猴头菇β-葡聚糖因其所具有的多种生物活性而备受关注，目前市场上也出现了以猴头菇多糖为主要功效成分的功能性食品。

短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFA)，是人体结肠细菌发酵的主要产物。主要包括乙酸、丙酸和丁酸。短链脂肪酸主要来自大肠内碳水化合物发酵和蛋白质降解，肠道菌群通过产生短链脂肪酸，对人体多个器官和代谢产生较大的影响，从而影响身体健康。

研究认为，猴头菇β-葡聚糖在人体的消化吸收过程中，可被肠道中的微生物利用，产生短链脂肪酸，因此，猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群的调节能力决定了猴头菇β-葡聚糖对个体健康的影响。同时，随着肠道菌群的测序技术的发展和普及，根据肠道菌群测序结果能更直接的判断猴头菇β-葡聚糖对健康的影响。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：如何评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种评估猴头菇β-葡聚糖对肠道菌群调节能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)：准备猴头菇β-葡聚糖；

步骤2)：准备粪便供试液：将粪便加入到PBS溶液中，蜗旋混匀，然后过滤，去除大颗粒，获得粪便悬浊液；

步骤3)：猴头菇β-葡聚糖体外粪便发酵：将粪便悬浊液接种于猴头菇β-葡聚糖制成的发酵培养基中，37℃厌氧发酵，对肠道微生物进行体外培养；

步骤4)：发酵液中肠道微生物对猴头菇β-葡聚糖的代谢产物的响应值的检测：采用气相色谱法检测肠道微生物的代谢产物的含量；

步骤5)：高通量测序：取待测粪便各，将猴头菇β-葡聚糖以及低聚果糖分别接种于步骤3)所得的发酵培养基中进行体外粪便发酵后，提取基因组DNA，以该基因组DNA为模板选择16SrDNA的V3-V4区域进行扩增测序，进行高通量测序。

优选地，所述步骤1)中猴头菇β-葡聚糖的制备方法为：采用水提醇沉的方法，先将猴头菇粉与水按照重量比混合，加热蒸煮后浓缩，高速离心得到沉淀，用蒸馏水溶解该沉淀物，并透析2～3天，透析液冷冻干燥后即得猴头菇β-葡聚糖。

优选地，所述步骤2)中的粪便为人类粪便，其样品提供者在采样前2个月内未服用过抗生素或益生元。

优选地，所述步骤2)中PBS溶液使用前经灭菌、厌氧处理；所述PBS溶液的pH值为7.0，浓度为0.1M；所得粪便悬浊液的浓度为0.1g/mL。

优选地，所述步骤2)中过滤所采用的滤网规格为800目。