[发明专利]一种无血清低DMSO细胞冻存液及其应用有效
申请号: | 202010307890.6 | 申请日: | 2020-04-17 |
公开(公告)号: | CN111296412B | 公开(公告)日: | 2022-10-04 |
发明(设计)人: | 张众;尚世旺;张鹏 | 申请(专利权)人: | 赛尔瑞成(北京)生命科学技术有限公司 |
主分类号: | A01N1/02 | 分类号: | A01N1/02 |
代理公司: | 北京格允知识产权代理有限公司 11609 | 代理人: | 谭辉 |
地址: | 102200 北京市昌平区中关*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 血清 dmso 细胞 冻存液 及其 应用 | ||
1.一种无血清细胞冻存液,其特征在于,所述冻存液以10ml计由如下组分组成:8.5ml的无血清细胞培养基、4%(v/v)至6%(v/v)的二甲基亚砜、0.05g的甘露糖、0.05g的山梨醇、0.01g的牛磺酸、0.01g的苏氨酸、0.02g丝氨酸和余量的水;
其中,所述无血清培养基选自RPMI-1640培养基、DMEM高糖培养基中的一种。
2.根据权利要求1所述的冻存液,其特征在于,所述冻存液包含5%(v/v)的二甲基亚砜。
3.一种细胞冻存液试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含无血清细胞培养基、二甲基亚砜、甘露糖、山梨醇、苏氨酸、丝氨酸、牛磺酸和无菌水;其中所述试剂盒用于制备权利要求1或2所述的冻存液。
4.一种无血清细胞冻存液的制备方法,其特征在于,所述方法采用权利要求3所述的试剂盒制备权利要求1或2所述的冻存液。
5.一种细胞冻存方法,其特征在于,所述方法采用权利要求1或2所述的冻存液或者由权利要求3或4所述的试剂盒配制的冻存液进行冻存。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
(1)使用所述冻存液将待冻存的细胞稀释成细胞悬浮液;
(2)然后将所述细胞悬浮液转移到冻存管冻存。
7. 根据权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述细胞悬浮液的浓度为1 x 106个细胞/ml-1 x 107个细胞/ml。
8.根据权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述冻存是将装有细胞悬浮液的冻存管直接放置于-70℃以下冰箱冻存。
9.根据权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述方法在步骤(1)之前还包括培养细胞的步骤。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,培养细胞的步骤通过将细胞培养至80%至90%的汇合度来进行。
11.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,培养细胞的步骤通过将细胞培养至85%的汇合度来进行。
12.根据权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述细胞为贴壁细胞,所述方法在步骤(1)之前还包括使用胰酶进行消化的步骤。
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